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yuzhongbaihe新虫 (正式写手)
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[求助]
连接与转化实验已有1人参与
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已经做了好几次连接与转化，也能长出单菌落来，但最后验证全都是假阳性克隆。我的质粒和目的基因的浓度和od值如图片所示。我之前做的连接体系，目的基因和质粒各为3微升。用t4快速连接酶22℃连接10分钟，也尝试过16℃过夜连，转进100微升dh5a（我自己制备的）中。求大神给分析一下，失败做不出来的原因。 @youlinglyw @wizardfan @biostar2009 @飞约疯人院 发自小木虫Android客户端 |
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Esther_Young
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渊博震天: 金币+5, 鼓励回帖交流 2019-03-31 18:39:57
渊博震天: 金币+5, 鼓励回帖交流 2019-03-31 18:39:57
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目的基因加的量太少了 一般目的基因：载体为4:1 要目的基因尽可能多 因为载体太多会自连 要增加目的基因碰到载体的机会 所以要多加目的基因。另外 我没用过快速连接酶， 不知道你这个时间会不会略短 发自小木虫IOS客户端 |
2楼2019-03-31 18:02:04
渊博震天
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Yeast Display
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3楼2019-03-31 18:41:03
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