| 查看: 824 | 回复: 2 | ||
| 【悬赏金币】回答本帖问题，作者yuzhongbaihe将赠送您 25 个金币 | ||
yuzhongbaihe新虫 (正式写手)
|
[求助]
连接与转化实验已有1人参与
|
|
已经做了好几次连接与转化，也能长出单菌落来，但最后验证全都是假阳性克隆。我的质粒和目的基因的浓度和od值如图片所示。我之前做的连接体系，目的基因和质粒各为3微升。用t4快速连接酶22℃连接10分钟，也尝试过16℃过夜连，转进100微升dh5a（我自己制备的）中。求大神给分析一下，失败做不出来的原因。 @youlinglyw @wizardfan @biostar2009 @飞约疯人院 发自小木虫Android客户端 |
回复此楼» 猜你喜欢
球磨纳米粒子条件
已经有6人回复
-
球磨分散剂
已经有4人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有277人回复
-
阴阳离子交换剂！！！！
已经有3人回复
-
二苄基磷酰氯，磷酸接酚羟基，
已经有11人回复
-
二苄基磷酰氯，磷酰氯
已经有10人回复
-
酸酐或者羧酸酰氯化
已经有15人回复
-
酚羟基接入磷酸，磷酸酯化
已经有26人回复
Esther_Young
铜虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 142.1
- 红花: 2
- 帖子: 82
- 在线: 24.1小时
- 虫号: 3713611
- 注册: 2015-03-06
- 专业: 食品科学基础
★ ★ ★ ★ ★
渊博震天: 金币+5, 鼓励回帖交流 2019-03-31 18:39:57
渊博震天: 金币+5, 鼓励回帖交流 2019-03-31 18:39:57
|
目的基因加的量太少了 一般目的基因：载体为4:1 要目的基因尽可能多 因为载体太多会自连 要增加目的基因碰到载体的机会 所以要多加目的基因。另外 我没用过快速连接酶， 不知道你这个时间会不会略短 发自小木虫IOS客户端 |
2楼2019-03-31 18:02:04
渊博震天
版主 (职业作家)
Yeast Display
- MolEPI: 7
- 应助: 212 (大学生)
- 贵宾: 0.043
- 金币: 21772.4
- 散金: 257
- 红花: 55
- 沙发: 1
- 帖子: 4533
- 在线: 688.4小时
- 虫号: 2380836
- 注册: 2013-03-27
- 性别: GG
- 专业: 抗体工程学
- 管辖: 分子生物
3楼2019-03-31 18:41:03
5