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mosaki

铜虫 (初入文坛)

[求助] PCR如何入门已有2人参与

大家好,小木虫小白上来发帖,求助各位大神。
我是学中药的,没有生物基础,最近因为接到项目开始做植物DNA提取,PCR反应和酶切再跑胶,跑出来的胶真是一塌糊涂,求问各位,有什么书/刊物/方法能够自学提升PCR和跑胶水平?
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lizimu566

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
跟着师兄师姐多做几次是最好的方法了
2楼2019-03-13 16:11:19
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立林258369

铁杆木虫 (著名写手)

爱拼才会赢
3楼2019-03-13 18:46:56
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mosaki

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by lizimu566 at 2019-03-13 16:11:19
跟着师兄师姐多做几次是最好的方法了

哎 已经没有师兄师姐了 只有自己摸索

发自小木虫IOS客户端
4楼2019-03-13 19:36:49
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lizimu566

金虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by mosaki at 2019-03-13 19:36:49
哎 已经没有师兄师姐了 只有自己摸索
...

5楼2019-03-14 09:05:02
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xhw520lzz

金虫 (正式写手)

跟这个专业的同学做几次就可以,当年我也做过这个(我也是中药学专业的),
6楼2019-03-14 11:04:36
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mosaki

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by xhw520lzz at 2019-03-14 11:04:36
跟这个专业的同学做几次就可以,当年我也做过这个(我也是中药学专业的),

之前跟过,但是自己做的时候遇到问题就不知道怎么解决了

发自小木虫IOS客户端
7楼2019-03-14 11:20:24
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cry_2013

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
PCR这个说简单也简单,说复杂也挺复杂的,我没有专门学过PCR相关知识,做的也就是普通PCR,遇到问题也是从网上查查相关原因(其实也没遇到过太大的问题。。。。。。),不过入门的话我觉得你应该先查一下PCR原理,知道PCR是什么,也就知道每一步的意义了,然后就是模板、引物设计、扩增程序这一块吧,模板这块现在的试剂盒感觉都不太差,按说明书操作一般问题都不大的(制备模板样本太刁难除外啊),引物的话网上也有很多引物设计的方法和注意事项,我觉得模板质量没问题,引物只要二聚体,错配什么的不要太过分(主要是3'端尽量不要有错配),一般都没问题的,扩增程序这块,你用的酶说明书上都有参考程序的,退火温度我觉小范围内变化对扩增结果影响不会太大,另外延伸的时间一定要够啊,别说明书1000-2000bp/min就按2000走了,时间稍微宽裕点。另外跑胶不太好,如果是根本没扩出条带就算了,如果marker都没跑好,那肯定就是胶的问题了。我觉得PCR这个多做几次,遇到问题解决问题,慢慢就有经验了。不过楼主专门找PCR相关的书籍去学习挺好的,我也想过看书的,最终没看下去,以上废话挺多的,楼主觉得有用的就参考,觉得没用的就随便看看。。。
8楼2019-03-15 14:26:16
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