24小时热门版块排行榜     石溪大学接受考研调剂申请>

【调剂】北京石油化工学院2024年16个专业接受调剂
查看: 2270  |  回复: 7

星星不太萌

新虫 (小有名气)

[交流] 大家来聊聊构建载体那些事已有5人参与

一把辛酸泪,构建一个载体两个月了,年都没回家好好过,赶回学校接着构建,以为菌落PCR结果也不错,以为就要成功了,结果酶切一直切不出片段,我用的是XhoI,3小时切和半小时一样的结果,失望了

发自小木虫Android客户端
回复此楼

» 收录本帖的淘贴专辑推荐

实验所需技术

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

龙腾92

新虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
单酶切做的连接?

发自小木虫Android客户端
2楼2019-02-23 18:49:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

星星不太萌

新虫 (小有名气)

嗯嗯,XhoI在目的片段两端比较靠近的地方都有酶切位点

发自小木虫Android客户端
3楼2019-02-23 22:41:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

渊博震天

版主 (职业作家)

Yeast Display

优秀版主优秀版主


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
片段浓度要上去,实在连不起来就用无缝克隆
4楼2019-02-24 09:02:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zxd95

至尊木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
单酶切后,先用碱性磷酸酶处理载体,防止自连,然后再连接。

发自小木虫Android客户端
追梦的人
5楼2019-02-24 16:44:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

星星不太萌

新虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by zxd95 at 2019-02-24 16:44:02
单酶切后,先用碱性磷酸酶处理载体,防止自连,然后再连接。

具体怎么操作呢?
我先用XhoI单酶切得到了目的片段,和线性载体

发自小木虫Android客户端
6楼2019-02-24 18:37:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cry_2013

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
6楼: Originally posted by 星星不太萌 at 2019-02-24 18:37:20
具体怎么操作呢?
我先用XhoI单酶切得到了目的片段,和线性载体
...

单酶切好像需要去磷酸化吧,要不载体容易自连,去磷酸化好像需要去磷酸化酶,需要作用时间再具体就不知道了,说明书上应该都有
7楼2019-02-28 09:06:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lizimu566

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
7楼: Originally posted by cry_2013 at 2019-02-28 09:06:10
单酶切好像需要去磷酸化吧,要不载体容易自连,去磷酸化好像需要去磷酸化酶,需要作用时间再具体就不知道了,说明书上应该都有...

我们酶切完直接加入去磷酸37度15min
8楼2019-02-28 10:32:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 星星不太萌 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[论文投稿] AC审稿 +3 马winner 2024-04-26 6/300 2024-04-27 09:08 by 马winner
[硕博家园] 博士白读了 +47 Da_Meng_Zi 2024-04-21 52/2600 2024-04-27 08:25 by shl2112501
[有机交流] 如何分离原料与产品 5+4 qwerasdf587 2024-04-24 13/650 2024-04-26 23:18 by 119966984
[考博] 真的好想读博! +15 wangzhe_bs 2024-04-22 22/1100 2024-04-26 22:11 by 小木雄子
[论文投稿] 研二光催化6月底四篇二区什么水平 5+5 wjtab 2024-04-22 15/750 2024-04-26 19:25 by wjtab
[考博] 申博求助 +4 dskabdh 2024-04-24 11/550 2024-04-26 15:54 by dskabdh
[基金申请] 两类问题算是白选了~ +7 jurkat.1640 2024-04-23 12/600 2024-04-26 14:39 by lucky_my2010
[硕博家园] 考研,求职还是考编? +15 xizj 2024-04-21 24/1200 2024-04-26 11:49 by Kan客
[考研] 381求调剂 +4 小刺猬987654321 2024-04-25 6/300 2024-04-26 10:57 by czl12138
[论文投稿] Chemical Engineering Journal投稿3周了,一直显示With editor状态。这是送审了吗? 10+4 yifeng11 2024-04-20 13/650 2024-04-26 09:48 by yifeng11
[考博] 取博导收留 5+4 zzb777888 2024-04-20 10/500 2024-04-26 08:52 by polymerfriend
[教师之家] 某种做法不行。说过几遍了。同学还那样做。再那样做就给低分 +4 河西夜郎 2024-04-24 4/200 2024-04-26 08:51 by Quakerbird
[论文投稿] 一直找不到审稿人 +5 lizhengke06 2024-04-21 6/300 2024-04-25 14:01 by chongdong
[基金申请] 国社科项目,你们学校都限额申报吗? +7 屡战屡败 2024-04-21 10/500 2024-04-25 12:10 by 屡战屡败
[访问学者] CSC的访问学者申请,没有个评审意见,也不知道怎么改,还有必要申请吗 +4 flyingship 2024-04-20 4/200 2024-04-24 21:09 by 59038mute
[基金申请] 化学结清有情发出来了 +3 starboy7286 2024-04-20 3/150 2024-04-24 15:52 by 嘿,黑贝
[教师之家] 大家访学都是怎么找的啊? +3 luokereng 2024-04-22 3/150 2024-04-24 11:40 by xuechenli
[论文投稿] 期刊推荐 20+4 木颜尘ip 2024-04-22 7/350 2024-04-24 10:06 by bobvan
[考博] 申博成果界定是根据Jcr分区还是中科院分区 +4 我属驴核动力驴 2024-04-22 5/250 2024-04-24 08:47 by 晓目崇
[教师之家] 找工作过程中碰到好多人问南京某新换校长211的政策,规定如下 +15 ZHONGWU_U 2024-04-21 17/850 2024-04-24 05:12 by juta256
信息提示
请填处理意见