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暴走的小鱼干

新虫 (小有名气)

[求助] race引物设计问题已有4人参与

我设计好了引物,但是我看说明书发现那个15个长度的序列,请问我是要把这一段序列加在我设计的引物前面,再发给公司合成吗?

race引物设计问题


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渊博震天

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drwhoknowss: 金币+3, 鼓励交流 2018-07-07 01:34:26
15bp那个是用来做无缝克隆连接的,需要再额外购买takara家的试剂盒,你想一步到位的话就加上。不想买的话就可以通过TA克隆来做

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2楼2018-06-08 06:48:38
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【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by 生物里小可爱 at 2018-07-06 00:35:59
求助,引物怎么设计,我也用的takara的试剂盒,但是没太看懂那个原理。引物需要设计在5/3端么

GSP引物设计是这样的,首先在你已经p出来测序的中间序列中设计GSP1引物,注意别与接头引物形成稳定二聚体啥的,同时退火温度要高。GSP2设计同GSP1,GSP2是为了防止第一轮非特异性扩增而进行巢式PCR设计的引物,有时候可能需要三轮才出特异条带。GSP设计的时候尽可能接近两端,1000bp以内很容易P成功。当特异性条带出现后TA克隆去测序,出来的序列再与已知中间序列拼接即可知道完整序列。5'相对要难一些,注意RNA完整性一定要高!!!
11楼2018-07-13 13:33:31
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