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七分天注定

新虫 (正式写手)

[求助] 老师,我做的大豆基因的克隆,通过rna反转录cdna然后进行...已有2人参与

老师,我做的大豆基因的克隆,通过rna反转录cdna然后进行扩增,引物是老师设计的,扩增后用凝脂糖琼脂电泳,出来目的条带了,然后我回收错误了,想再次扩增,就再也扩不出来了,这是什么原因呢,我用的是温度梯度退火,别的条件都没有变,求老师解答,谢谢 @biostar2009

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biostar2009

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
回收之前装样的管子还在么?捡回来,加点水,当模板继续P
4楼2017-05-23 12:34:12
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普通回帖

cqqxmc

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
一般是模板的原因
这个基因表达量是不是很低?在不同组织部位的表达量不同
cDNA比较娇贵,可以重新提取表达量高的组织的RNA反转录得到质量更好的cDNA试试
2楼2017-05-23 08:47:49
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七分天注定

新虫 (正式写手)

3楼2017-05-23 08:56:51
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二小神奇

新虫 (初入文坛)

cDNA可能降解了  建议用之前的RNA重新反转再扩增
5楼2017-05-23 13:59:29
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七分天注定

新虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by biostar2009 at 2017-05-23 12:34:12
回收之前装样的管子还在么?捡回来,加点水,当模板继续P

谢谢老师,这个反转录的时候需要注意什么吗,怎样能减少降解,

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6楼2017-05-23 20:57:08
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七分天注定

新虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by biostar2009 at 2017-05-23 12:34:12
回收之前装样的管子还在么?捡回来,加点水,当模板继续P

那个把不同温度的回收在一起了,应该不能用了吧,我也p过,不过没p出来

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7楼2017-05-24 10:49:53
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