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ch854355011新虫 (初入文坛)
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[求助]
SDS-PAGE蛋白表达 已有7人参与
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最近原核表达SDS-PAGE一直没结果。也不知道出现了什么问题。原核表达载体是pet28a，菌BL21，培养基LB，经菌液pcr，酶切和测序，表明重组质粒构建成功，诱导浓度1mmol/L，取样0-5h，但是每次跑出来的条带都一样，没有所需目的条带的表达，目的基因在27或33kd，跑出来的图片每次都没表达，并且条带深浅度一样。求助给点意见。 `~~~4[GB2GK@Q)LEVF_[JU0.png |
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X小天T
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6楼2016-01-26 22:03:47
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2楼2016-01-26 19:53:25
wangpeng8
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3楼2016-01-26 19:54:22
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- 专业: 微生物生理与生物化学
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你这个是全细胞加热后跑的么，还是细胞超声后跑的上清？建议沉淀也跑一下，看看目的蛋白是不是在沉淀包涵体中。另外不知道你诱导温度，一般低温过夜诱导较好，可以做诱导温度优化。还有iptg诱导浓度可以适当降低些 发自小木虫Android客户端 |
4楼2016-01-26 20:55:00
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