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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 杂带较多，如何处理
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丝竹睛明

新虫 (小有名气)
你这个的话，引物本身不好，实在要调整的话引物量减半试试，不过还是建议换引物

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11楼2016-01-25 21:20:27
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彩果果

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可能是退火温度太低，你可以在50-65之间先筛一下温度看看，范围广，可以先间隔2度的筛一下，这样工作量会小一些，出来结果再看看怎么样。   如果结果还不好，可能需要重新设计引物了

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低调！
12楼2016-01-25 21:36:09
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lipo2014

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
提高退火温度啊，话说你的引物是什么啊，在NCBI上搜一下看看Tm值啊，我们一般60度用62度就行，如果引物不太好就65度，但65度可能产量少，也可以65度touchdown，没见过这么低的退火温度。。。。
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13楼2016-01-25 23:18:40
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曾文正公

金虫 (著名写手)
退火温度怎么这么低  一般都是55-60啊
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只有非常努力，才能看起来毫不费力
14楼2016-01-25 23:46:37
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小鱼儿11

金虫 (小有名气)
我也是。。。。

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15楼2016-01-26 00:17:51
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ly_0510

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引物浓度也很高吧   我们一般都用的是10uM的   ，不知道是不是你这个实验有特殊要求啊 ，但是退火温度真的很低。
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16楼2016-01-26 14:50:20
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MarchZR

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

杂带多，提高退火温度，另外引物二聚体严重，建议使用高特异性的hot start taq酶扩增，提高灵敏度和特异性
资料：提高PCR特异性方法总结：http://www.detaibio.com/topics/pcr-faq-specific-amplify.html
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17楼2016-01-28 14:58:55
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