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染色体步移 已有1人参与
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| 目前在利用takara的genome walking试剂盒克隆玉米中一段启动子序列，第一次利用AP1-4的时候均得到了1.3kb的产物，设计特异引物克隆这一段，已经测序得到这一段序列。在此基础上进行第二次walking，第三轮的GSP设计在距离第一次1.3kb 5‘端140bp的位置，这次AP1,3，4得到的产物相似，AP2得到产物略小约900bp，然后设计一对引物可以检测出上面提到的140bp进行初筛，结果只有AP2中所有克隆都含有这一段，克隆、测序、BLAST比对，900bp可以比对到染色体上相应位置，并且与第一次的1.3kb可以重合。拼接后得到约2.0kb的区段，只需要对1.7kb的区段进行研究，设计引物扩增，在玉米B73中克隆到目的条带，但是未知材料里没有任何产物。请教一下各位，这是什么情况？明明两轮WALKING得到的产物可以拼接上而且在未知材料中得到的1.7kb也可以比对到染色体上相应位置，但是扩增不出来，其中的1.3kb已经得到证实，PCR体系及条件没有问题，求解。 |
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5楼2016-04-12 17:41:21
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dushangyun
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