应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 染色体步移
141/2返回列表12下一页
查看: 2943  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

faile18

金虫 (小有名气)

[求助] 染色体步移 已有1人参与

目前在利用takara的genome walking试剂盒克隆玉米中一段启动子序列，第一次利用AP1-4的时候均得到了1.3kb的产物，设计特异引物克隆这一段，已经测序得到这一段序列。在此基础上进行第二次walking，第三轮的GSP设计在距离第一次1.3kb 5‘端140bp的位置，这次AP1,3，4得到的产物相似，AP2得到产物略小约900bp，然后设计一对引物可以检测出上面提到的140bp进行初筛，结果只有AP2中所有克隆都含有这一段，克隆、测序、BLAST比对，900bp可以比对到染色体上相应位置，并且与第一次的1.3kb可以重合。拼接后得到约2.0kb的区段，只需要对1.7kb的区段进行研究，设计引物扩增，在玉米B73中克隆到目的条带，但是未知材料里没有任何产物。请教一下各位，这是什么情况？明明两轮WALKING得到的产物可以拼接上而且在未知材料中得到的1.7kb也可以比对到染色体上相应位置，但是扩增不出来，其中的1.3kb已经得到证实，PCR体系及条件没有问题，求解。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
1楼 2016-01-22 10:22:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

dushangyun

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

想问问您的PCR循环的程序，跪求！
赞一下(1人) 回复此楼
经不住逝水流年，逃不过此间少年
4楼2016-03-14 18:40:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jingyu90217

新虫 (小有名气)
你好  我也在做染色体步移  也是takara的试剂盒  我第一次已得到1164bp

发自小木虫IOS客户端
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2016-04-14 01:56:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

反应链

新虫 (正式写手)
InDel
回复此楼
2楼2016-01-22 11:29:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

faile18

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 反应链 at 2016-01-22 11:29:53
InDel

克隆用的引物是根据测序结果设计的，即使有InDel，也应该会有条带吧？
赞一下 回复此楼
3楼2016-01-22 12:34:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yali002

新虫 (初入文坛)
楼主 请问  你回收的第3次染色体步移产物的片段有没有要求？一定要比第2次的产物分子量小么？
赞一下 回复此楼
5楼2016-04-12 17:41:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jingyu90217

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by jingyu90217 at 2016-04-14 01:56:40
你好  我也在做染色体步移  也是takara的试剂盒  我第一次已得到1164bp

但是后面第二次步移回收第二轮的产物就一直连不上t载体。测序要不是空载要不就只能找到引物序列 无重叠区。真是要疯了……折腾很久了……要怎么改进一下呢？
染色体步移



发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
7楼2016-04-14 02:01:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bbaa5252

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by jingyu90217 at 2016-04-14 02:01:48
但是后面第二次步移回收第二轮的产物就一直连不上t载体。测序要不是空载要不就只能找到引物序列 无重叠区。真是要疯了……折腾很久了……要怎么改进一下呢？

...

你好，我最近也在做这个实验，我想问一下我为什么我2nd和3rd的扩增片段超过10000bp啊，感觉离点样孔很近，不知道是什么原因
赞一下 回复此楼
8楼2016-10-19 18:57:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

renyi2015

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by jingyu90217 at 2016-04-14 01:56:40
你好  我也在做染色体步移  也是takara的试剂盒  我第一次已得到1164bp

你好，实验成功了吗？这个试剂盒多少钱啊

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
9楼2016-10-29 11:34:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

胡奎0925

木虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by renyi2015 at 2016-10-29 11:34:32
你好，实验成功了吗？这个试剂盒多少钱啊
...

1000+
回复此楼
宁愿被误会，坚决不解释
10楼2017-05-08 09:29:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 faile18 的主题更新
141/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +7 Lanmanbaby 2026-08-09 14/700 2026-08-09 23:33 by Tide man
[基金申请] 关于代码变化问题，想知道的进来 +15 且听虎啸 2026-08-07 22/1100 2026-08-09 22:13 by 布布和一二
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +10 布布和一二 2026-08-08 21/1050 2026-08-09 17:21 by 天神眷顾
[基金申请] fileCode有新解读？ +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
[基金申请] 关于filecode，很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制，评价高的钱多评价低的钱少，但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
[基金申请] 好奇怪的filecode +3 布布和一二 2026-08-08 4/200 2026-08-08 17:46 by zhanghaozhu
[基金申请] 基金中了 +14 laoda193707 2026-08-06 14/700 2026-08-08 00:23 by 实验小白ha
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
[基金申请] 娱乐 +6 Tide man 2026-08-03 6/300 2026-08-07 22:40 by 铁帽子农民
[基金申请] 化学口download_prp&fileCode的固定段好像这几天一直没变，有变的大神么？ +3 Tide man 2026-08-07 4/200 2026-08-07 22:39 by Tide man
[基金申请] 固定端突然变了，今天 +6 archvillain 2026-08-06 10/500 2026-08-07 16:03 by 医学老男孩
[基金申请] 听说今天filecode变了 +24 布布和一二 2026-08-06 47/2350 2026-08-07 16:02 by zhiyanjiang
[基金申请] filecode变化情况 +6 布布和一二 2026-08-07 22/1100 2026-08-07 14:45 by 且听虎啸
[基金申请] 大家散了吧，后缀研究没有意义，别浪费时间了，过好目前的每一天，不要焦虑 +5 Tide man 2026-08-06 7/350 2026-08-07 13:11 by 医学老男孩
[基金申请] 求各位大神看下 100+6 hpkpkpkp 2026-08-05 33/1650 2026-08-06 14:49 by zhiyanjiang
[基金申请] 8月时间戳变的，举个手。玩一下，释放压力 +9 archvillain 2026-08-04 11/550 2026-08-05 20:06 by wlwhappy
[基金申请] 好消息？这个有何含义？？？ +8 Tide man 2026-08-05 10/500 2026-08-05 16:14 by xmuxiaoyu
[基金申请] 纯娱乐，不喜欢勿喷 +7 Tide man 2026-08-04 10/500 2026-08-04 15:10 by loufangrui
[基金申请] 什么时候能放榜呀？ +3 Jacob678 2026-08-03 3/150 2026-08-03 16:14 by gltch
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭