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铁板基围虾

新虫 (初入文坛)

[求助] 新手 关于引物设计的疑惑 已有3人参与

我做的工作跟动物免疫有一点联系  最近老师让我设计引物扩增表达一个病毒的结构蛋白 模板的来源是动物病料。我现在疑惑的是扩增的话是扩增整个CDS还是可以选取其中一部分序列?  如果要扩增整个CDS的话  引物的设计可以在这个CDS的外面吗? 我看到有的人说直接选取开头和结尾,这样做会不会有问题?
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原海亮

木虫 (著名写手)


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-01-14 23:03:16
要是做蛋白表达的话,如果没有其他辅助domain的话,应该保证CDS序列的完整,只能从开头和结尾设计,如果往外多扩增则无法保证目的蛋白的正确性

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天空才是极限,我有信心飞的更高!
4楼2016-01-14 20:37:29
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我是淡淡老师

新虫 (初入文坛)


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-01-14 23:02:52
直接选开头结尾,加上酶切位点保护序列,注意上下游引物的退火温度,不要相差太大,3端最好是gc结尾

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2楼2016-01-14 16:35:50
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铁板基围虾

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 我是淡淡老师 at 2016-01-14 16:35:50
直接选开头结尾,加上酶切位点保护序列,注意上下游引物的退火温度,不要相差太大,3端最好是gc结尾

谢谢回答  我的片段3K  扩起来难度大不大啊(新手 上无师兄 下无师妹)
3楼2016-01-14 17:06:36
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我是淡淡老师

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
引用回帖:
3楼: Originally posted by 铁板基围虾 at 2016-01-14 17:06:36
谢谢回答  我的片段3K  扩起来难度大不大啊(新手 上无师兄 下无师妹)...

3k的话,一般的高保真酶都不怎么好用了,除非你把这个酶的实验条件最优化。要选那种长片段高保真酶,会比较轻松

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5楼2016-01-15 10:59:22
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