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夏木鲁鲁

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR的结果只有引物二聚体出来,目的片段没有。换过很多条件。求大神指导 已有9人参与

做的是金银花ITS2序列
体系 总25ul
mix 12.5ul
引物1 1ul
引物2 1ul
双蒸水 7.5ul
模板    3ul

下面是两个引物的条带。不过可能图倒了

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夏木鲁鲁

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
15楼: Originally posted by pengc201 at 2016-01-17 01:03:56
这个有太多的可能了。。
1. 模版浓度太低或者质量不好。(do a housekeeping gene positive control)
2. annealing temperature is not optimized, do a gradient PCR
3. are you sure the extension time is en ...

其实有很多方面我确实不确定。我们目的片段查了文献232bp。反应条件老师给的,没出来结果才想的优化。另,实验室条件不太好,梯度pcr只能一遍一遍的做(ಥ_ಥ。我还有很多方面要学,最后,多谢给我建议。
21楼2016-01-21 11:59:09
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夏木鲁鲁

新虫 (初入文坛)

因为传图好像有限制。大家将就看(⊙o⊙)。
反应条件。预变性94c。  5min
                      变性94c。  30s
                      退火58c      30s
                      延伸72c       45s
共40个循环
                      最后延伸72c   10min
2楼2016-01-13 19:42:41
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夏木鲁鲁

新虫 (初入文坛)

除了58c退火以外。56 59  60  都做了。效果差不多。
体系模板2ul  3ul  4ul  5ul   都做了。结果没有什么变化
3楼2016-01-13 19:45:34
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金木研么么哒

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
没有条带的话就降温,试试56,55,54,53,52

发自小木虫Android客户端
4楼2016-01-13 19:51:12
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