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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 综合其他 » 转化涂菌 一般几个小时之后开始长菌
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leland2

新虫 (正式写手)

[求助] 转化涂菌 一般几个小时之后开始长菌 已有2人参与

本人最近一直在做转化涂菌。昨天晚上100ul 转化体系 +400ul2Y-T  200转 50min  之后4000转 8 min 。再用200ul 重悬菌。图板。   十小时之后观察未长菌
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1楼 2015-12-31 09:31:16
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肖大爷1314

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
转化结束后不能立刻铺板，因为虽然质粒已经转进去了，但是抗生素的蛋白还没有表达出来，所以直接铺板会被抗生素杀死。建议做完转化后，先在不含抗生素的LB液体培养基里摇半小时再铺板。而且刚经历过感受态的细胞比较脆弱，活性很差，不经过复苏的话直接涂在带有抗生素的平板上会被杀死。当然，也可能是连接效率低，感受态质量不好，转化效率低，复苏时间太少，涂板时涂布棒温度过高等等原因，做好做个对照实验，不然错在哪里都不知道。祝顺利！
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追求真理的道路上永远不会孤独
2楼2015-12-31 10:23:16
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donggang1018

新虫 (初入文坛)
大多数情况下，如果感受态状态好的话，不复苏，依然可以长菌，转化实验我都是从来不用复苏的，做出的效果也很好，如果十小时都没有长菌，那就不会再长了，如果超过十六小时，长出来的可能是杂菌。

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3楼2015-12-31 14:14:05
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siriusxuan

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
12小时左右，10小时长得太小，你可能没看到。
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此座可言轻社稷，江山万里起风尘。
4楼2016-01-01 09:52:09
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leland2

新虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by siriusxuan at 2016-01-01 09:52:09
12小时左右，10小时长得太小，你可能没看到。

谢谢
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5楼2016-01-03 13:01:45
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leland2

新虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by donggang1018 at 2015-12-31 14:14:05
大多数情况下，如果感受态状态好的话，不复苏，依然可以长菌，转化实验我都是从来不用复苏的，做出的效果也很好，如果十小时都没有长菌，那就不会再长了，如果超过十六小时，长出来的可能是杂菌。
...

我超过16小时候，长了6 、7 个细菌，记得之前有杂菌都是一个。这次不知道什么情况。中间一个菌  然后就是靠近边缘4 、5个
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6楼2016-01-03 13:03:42
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