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雪晴2013

金虫 (正式写手)

[求助] 原核pet28a表达的菌株诱导不出目的蛋白? 已有3人参与

表达np基因的部分片段,大概1100bp,克隆到pet28a上,在BL21中,IPTG1mm,37*,200r表达4h,然后取诱导、未诱导全菌直接跑的PAGE,看不出差异带,测序鉴定证明序列没有问题,为什么蛋白没有表达呢?
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风雨中的微笑

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
26楼: Originally posted by 总有二狗咬朕 at 2015-12-28 09:39:14
蛋白不表达有很多原因
1.诱导条件
蛋白的表达要考虑诱导时间、温度、IPTG浓度等,任何一个都会造成不表达或之所以检测不到,可能是诱导的蛋白已经降解。一般诱导条件设置: TPTG终浓度为1mM/ml(如果有诱导后死菌 ...

如果读码框错误怎么解?
35楼2016-08-22 16:50:06
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bhl2012

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
过夜菌 培养到对数期之后进行诱导的吗

发自小木虫IOS客户端
2楼2015-12-24 16:15:33
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雪晴2013

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by bhl2012 at 2015-12-24 16:15:33
过夜菌 培养到对数期之后进行诱导的吗

培养过夜后,1:100转种培养到对数生长期再诱导的
3楼2015-12-24 21:55:15
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siriusxuan

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你搞清楚!BL21不能表达PET,必须DE3的才可以,BL21 DE3 ,Rosetta DE3都行,用BL21鬼都出不来,根本没有T7启动子。
此座可言轻社稷,江山万里起风尘。
4楼2015-12-25 03:07:28
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