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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 综合其他 » 原核pet28a表达的菌株诱导不出目的蛋白？
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雪晴2013

金虫 (正式写手)

[求助] 原核pet28a表达的菌株诱导不出目的蛋白？ 已有3人参与

表达np基因的部分片段，大概1100bp，克隆到pet28a上，在BL21中，IPTG1mm，37*，200r表达4h，然后取诱导、未诱导全菌直接跑的PAGE，看不出差异带，测序鉴定证明序列没有问题，为什么蛋白没有表达呢？
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1楼 2015-12-24 16:05:07
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siriusxuan

木虫 (正式写手)
引用回帖:
21楼: Originally posted by 雪晴2013 at 2015-12-26 23:14:35
是只有一端有His标签的，另一端加了终止密码子的，是想拿纯化的蛋白包被做间接ELISA检测...

尝试分析一下密码子偏好性吧
载体骨架如果没什么问题的话，多了点氨基酸不至于会表达不出。
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此座可言轻社稷，江山万里起风尘。
22楼2015-12-26 23:22:28
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bhl2012

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
过夜菌 培养到对数期之后进行诱导的吗

发自小木虫IOS客户端
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2楼2015-12-24 16:15:33
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雪晴2013

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by bhl2012 at 2015-12-24 16:15:33
过夜菌 培养到对数期之后进行诱导的吗

培养过夜后，1:100转种培养到对数生长期再诱导的
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3楼2015-12-24 21:55:15
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siriusxuan

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你搞清楚！BL21不能表达PET，必须DE3的才可以，BL21 DE3 ，Rosetta DE3都行，用BL21鬼都出不来，根本没有T7启动子。
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此座可言轻社稷，江山万里起风尘。
4楼2015-12-25 03:07:28
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