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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 求解溶解曲线的小峰意义
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静mo2010

银虫 (正式写手)

[交流] 求解溶解曲线的小峰意义 已有4人参与

如图，用SYBR染料跑的Q-PCR，溶解曲线在主峰后面还有出现一个小峰，Ct值33.52.扩增曲线如图中惨不忍睹。。求大神讲解其中缘由~~
想弄清楚：
1、引物是否特异性不好，是否需要更换？后面的小峰究竟是什么？是不知名的非特异产物？
2、是引物的扩增效率太低，还是因为本来模版就太低（图中cDNA是经过1：10稀释的），我需要再不经过稀释做一次吗？

求解溶解曲线的小峰意义
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求解溶解曲线的小峰意义-1
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踮起脚尖、就更靠近阳光
1楼 2015-12-23 22:14:20
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gwq教练

金虫 (初入文坛)
★
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可能是引物特异性不好造成的。还有建议跑一下标准曲线，看看扩增效率先，如果扩增效率高，就有问题了，要换引物
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3楼2015-12-24 09:43:29
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qq1987nana

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
溶解曲线主要体现产物的，一个峰说明你的产物就一个，特异性很强。如果溶解曲线不单一稳定，说明产物不好，引物不行

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2楼2015-12-23 22:27:27
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vivd娟

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
感觉也没那么差啊
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4楼2015-12-24 13:33:47
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足下客

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
溶解曲线双峰，说明产物不单一。你的Ct值较大，建议cDNA的浓度大一些。
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5楼2015-12-24 13:56:45
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