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静mo2010

银虫 (正式写手)

[交流] 求解溶解曲线的小峰意义 已有4人参与

如图,用SYBR染料跑的Q-PCR,溶解曲线在主峰后面还有出现一个小峰,Ct值33.52.扩增曲线如图中惨不忍睹。。求大神讲解其中缘由~~
想弄清楚:
1、引物是否特异性不好,是否需要更换?后面的小峰究竟是什么?是不知名的非特异产物?
2、是引物的扩增效率太低,还是因为本来模版就太低(图中cDNA是经过1:10稀释的),我需要再不经过稀释做一次吗?

求解溶解曲线的小峰意义
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求解溶解曲线的小峰意义-1
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踮起脚尖、就更靠近阳光
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qq1987nana

新虫 (小有名气)


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溶解曲线主要体现产物的,一个峰说明你的产物就一个,特异性很强。如果溶解曲线不单一稳定,说明产物不好,引物不行

发自小木虫Android客户端
2楼2015-12-23 22:27:27
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gwq教练

金虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
可能是引物特异性不好造成的。还有建议跑一下标准曲线,看看扩增效率先,如果扩增效率高,就有问题了,要换引物
3楼2015-12-24 09:43:29
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vivd娟

金虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
感觉也没那么差啊
4楼2015-12-24 13:33:47
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足下客

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
溶解曲线双峰,说明产物不单一。你的Ct值较大,建议cDNA的浓度大一些。
5楼2015-12-24 13:56:45
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