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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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xiximary

铁杆木虫 (正式写手)

[求助] RT-PCR引物求助 已有1人参与

我做RT-PCR时,参照基因特异性很好,就是目的基因总有一条非特异性条带,重新设计引物,调退火温度怎么也去除不了。看网上说要横跨内含子,不知怎么找基因的内含子和外显子?我是在NCBI上找到基因的序列设计的引物,这里是mRNA,应该没有内含子。我看网上报道RT-PCR产物片段最好在200bp以内。我是新手,请问该怎么设计这种引物才能成功?还有好多不懂的东西,望各位专家赐教,非常感谢。
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gnot_nail

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
简单说,就是你拿cDNA序列来设计引物,然后会有一个产物的大小,大约80-200bp,然后你还需要DNA序列的信息,当你把设计的引物放到DNA序列中查找时(借助相关软件比如vector nti),会得到你这对引物在DNA中的距离大小,如果在DNA中的片段比在cDNA中的片段要大,那么就横跨内含子了。
2楼2015-12-21 18:28:36
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xiximary

铁杆木虫 (正式写手)

gnot_nail您好:我设计引物时是在NCBI网上查到的mRNA序列设计的引物,由于目的基因扩增有一条小的非特异条带,怎么改变条件也去除不了。看网上说要横跨内含子,不知怎么找基因的内含子和外显子?请问该怎么设计这种引物才能成功?谢谢您。
3楼2015-12-21 20:14:47
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4楼2017-08-21 03:16:32
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