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凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)

[求助] 荧光定量,ABI的机子、用的染料,扩增曲线和熔解曲线怎么成了这个样子已有2人参与

前期摸索中,普通PCR温度梯度60℃。
模板试过稀释了5倍和10倍,20ul体系,95℃5min,95℃10s,60℃ 10s,72℃ 15s,40个循环。
荧光定量产物电泳条带为目的条带,使用过八连管,染料是罗氏的。

荧光定量,ABI的机子、用的染料,扩增曲线和熔解曲线怎么成了这个样子
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小-丑鱼

捐助贵宾 (正式写手)

对我而言可爱的她

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
应该是StepOne Plus跑的,你用的就是配套的HRM软件。
以经验来看,如果电泳验证没问题但HRM图不对的话,可能要调整下HRM的程序,尤其是升温速率,它的最大最小值跨度很大,可以试一试。
另外它有配套的染料,可以把你的原始数据和疑问发给他们的FAS,可以得到很专业很及时的回复。
放不下的,除了手中的金箍棒,还有你的手。
24楼2015-12-16 12:18:53
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苯苯兔

银虫 (初入文坛)

也不太懂,求高手出来解答
2楼2015-12-15 09:02:37
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凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)

别沉啊,求大神啊
3楼2015-12-15 10:26:47
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凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)

管子问题?染料问题?体系问题?模板问题?操作问题?
4楼2015-12-15 10:31:03
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