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[求助]
SYBR荧光定量溶解曲线
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急！急！！急！！！ 真菌的2个目的基因--9300和5053，引物设计好，先用DNA检验，溶解曲线图分别为DNA9300和DNA5053。然后做定量，溶解曲线图分别为RNA9300和RNA5053。 RNA用Trizol提取，OD值和电泳检测都过关。反转录前做gDNA去除处理，阴性对照在40个循环内的CT值为Undetermined（用的是Takara整套试剂）。 定量PCR用3步法扩增程序:（仪器为ABI 7500） stage1: 95℃ 30s stage2: 95℃ 5s, 56℃ 30s, 72℃ 30s, 40个循环 Melt Curve Stage 目的基因为何会出现这种情况，究竟是哪里出了问题？？？？（actin一直都没有问题） 烦请高手指点迷津！谢谢！！  DNA9300.jpg  DNA5053.jpg  RNA9300.jpg  RNA5053.jpg |
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