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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 各位大神，为什么pcr产物跑不出胶？且胶的亮度也不行。
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smile-20

金虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by hcf321283 at 2015-12-10 15:08:29
有点东西啊，但是二聚体蛮亮的，建议摸索下条件再扩增···

后来我又改了变性30秒和变性一分钟，退火三十秒，还是没有条带，这是怎么回事？

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everythingispossible
11楼2015-12-10 21:03:15
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smile-20

金虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by liyu6655 at 2015-12-10 16:21:02
为什么变性和退火要那么久啊？能看到条带啊！

后来我又改了变性30秒和变性一分钟，退火三十秒，还是没有条带，这是怎么回事？

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everythingispossible
12楼2015-12-10 21:03:46
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smile-20

金虫 (正式写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by lsl635600374 at 2015-12-10 18:10:09
引物浓度是多少？下面这个引物二聚体很亮
有条带，建议再做个温度梯度
这个pcr程序怎么来的，变性和退火时间太长了，整个下来估计三个小时了

10纳克每微升，程序是之前师兄的，后来我又改了变性30秒和变性一分钟，退火三十秒，还是没有条带，这是怎么回事？

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everythingispossible
13楼2015-12-10 21:06:56
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微醉江南梦

铜虫 (小有名气)
你首先得确定你的模板，引物没问题，再来考虑退火温度，以及pcr程序。如果引物、模板和退火温度只要有一个有问题，不管怎么改程序都一样。

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14楼2015-12-10 21:37:17
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SorryJ

银虫 (小有名气)
51°退火温度？貌似很低了，建议先好好看看你mix的使用说明，根据说明书和片段大小来确定你延伸时间。然后去做个退火温度梯度吧。

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15楼2015-12-11 00:35:43
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hcf321283

木虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by smile-20 at 2015-12-10 21:03:15
后来我又改了变性30秒和变性一分钟，退火三十秒，还是没有条带，这是怎么回事？
...

不是时间的摸索，而是退火温度的摸索，退火和延伸时间跟据你你产物大小来确定，退火温度跟据你你引物长度和gc含量来决定

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16楼2015-12-11 09:17:28
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