24小时热门版块排行榜    

查看: 2009  |  回复: 15

smile-20

金虫 (正式写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by hcf321283 at 2015-12-10 15:08:29
有点东西啊,但是二聚体蛮亮的,建议摸索下条件再扩增···

后来我又改了变性30秒和变性一分钟,退火三十秒,还是没有条带,这是怎么回事?

发自小木虫IOS客户端
everythingispossible
11楼2015-12-10 21:03:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

smile-20

金虫 (正式写手)

引用回帖:
9楼: Originally posted by liyu6655 at 2015-12-10 16:21:02
为什么变性和退火要那么久啊?能看到条带啊!

后来我又改了变性30秒和变性一分钟,退火三十秒,还是没有条带,这是怎么回事?

发自小木虫IOS客户端
everythingispossible
12楼2015-12-10 21:03:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

smile-20

金虫 (正式写手)

引用回帖:
10楼: Originally posted by lsl635600374 at 2015-12-10 18:10:09
引物浓度是多少?下面这个引物二聚体很亮
有条带,建议再做个温度梯度
这个pcr程序怎么来的,变性和退火时间太长了,整个下来估计三个小时了

10纳克每微升,程序是之前师兄的,后来我又改了变性30秒和变性一分钟,退火三十秒,还是没有条带,这是怎么回事?

发自小木虫IOS客户端
everythingispossible
13楼2015-12-10 21:06:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

微醉江南梦

铜虫 (小有名气)

你首先得确定你的模板,引物没问题,再来考虑退火温度,以及pcr程序。如果引物、模板和退火温度只要有一个有问题,不管怎么改程序都一样。

发自小木虫Android客户端
14楼2015-12-10 21:37:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

SorryJ

银虫 (小有名气)

51°退火温度?貌似很低了,建议先好好看看你mix的使用说明,根据说明书和片段大小来确定你延伸时间。然后去做个退火温度梯度吧。

发自小木虫Android客户端
15楼2015-12-11 00:35:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hcf321283

木虫 (小有名气)

引用回帖:
11楼: Originally posted by smile-20 at 2015-12-10 21:03:15
后来我又改了变性30秒和变性一分钟,退火三十秒,还是没有条带,这是怎么回事?
...

不是时间的摸索,而是退火温度的摸索,退火和延伸时间跟据你你产物大小来确定,退火温度跟据你你引物长度和gc含量来决定

发自小木虫IOS客户端
16楼2015-12-11 09:17:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 smile-20 的主题更新
信息提示
请填处理意见