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享受雅雨

新虫 (初入文坛)

应助: 1 (幼儿园)
金币: 15.1
帖子: 12
在线: 11.4小时
虫号: 3764280
注册: 2015-03-25
专业: 动物遗传学

[求助] race产物胶回收后做infusion链接，摇菌之后也很浓，但是涂板之后居然没长菌

我们有几个基因，有些基因是多条带，有些事单条带，多条带的我们都是切胶分开了的，用的是胶回收试剂盒内的回收液洗脱。接着做infusion连接、转化、涂板，单13个小时后培养板上没长菌，也换过ta克隆，粘性末端克隆，要么没长菌，要么长菌了的挑菌进行pcr之后，凝胶检测什么也没有，只有marker。想了一下把胶回收产物再进行pcr扩增一下，和race巢氏第三轮的循环数一样用了16个循环，检测后条带很弱，又增加了16个循环，效果要好点了，但是有弥散，也不知道后面该怎么做了。5‘race很顺利，怎么3’race这么难呢，大神求解啊