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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 做的质粒应该是6000bp。结果提质粒后跑胶只有3000bp左右
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hufan2441

铁虫 (小有名气)

[求助] 做的质粒应该是6000bp。结果提质粒后跑胶只有3000bp左右 已有3人参与

酶切后5500bp的载体和600bp的目的片段连接、转化、培养、提质粒后跑胶只有3000bp左右了，这应该是哪个方面出了问题呢？
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1楼 2015-11-26 21:48:35
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Demon黄

银虫 (小有名气)
首先，环状的是线性的2/3(大概的)，所以比较的时候要换算一下。其次，你得酶切才能知道你得目的片段连进去没有，连对没有。然后才能下决定留下哪个去测序。还有提质粒跑胶后，最亮的最快的是超螺旋，其次是线性的、最后是开环的（如果有三条带的话）。比较时以超螺旋为主
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11楼2015-11-30 18:17:39
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xufengnbu

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
确定没用错marker? 电泳图看看

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hufan2441
why is the way to success
2楼2015-11-26 21:52:57
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hufan2441

铁虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by xufengnbu at 2015-11-26 21:52:57
确定没用错marker? 电泳图看看

左边是5000Marker,右边是10000的
做的质粒应该是6000bp。结果提质粒后跑胶只有3000bp左右



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3楼2015-11-26 22:12:44
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misang

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
是酶切了电泳还是没有切？是用双酶切的吗？

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4楼2015-11-26 22:22:46
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