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微生物分离
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我想从土壤中分离一些细菌，放线菌，霉菌以及酵母菌 由于我是新手我们实验室在这一方面又比较欠缺，所以感觉无从下手 期待各位虫子能给介绍一下各种类型的菌分别应该选用哪种培养基以及操作步骤（包括操作中应当注意的问题） 帮忙推荐这方面的数或论文文献也可，甚至是实验中的一些心得也行 三言两语或宏篇大论都可以 很是着急，谢谢大家了 [ Last edited by youqing1025 on 2008-9-16 at 20:24 ] |
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周围环境中微生物的观察及从土壤中分离纯化微生物(转帖） 1.实验目的和要求 （1）通过对周围环境中微生物的观察，理解无菌操作原理，了解微生物的普遍存在性。 （2）通过从土壤中分离纯化微生物，掌握无菌操作技术。 2.实验材料和仪器 2.1配制肉汤蛋白胨固体培养基平板（每组15个） （1）牛肉膏5g； （2）蛋白胨10g； （3）NaCl 5g； （4）琼脂20g； （5）自来水1000mL pH 7.5，0.1MPa，121℃来菌20min。 2.2无菌生理盐水 （1）250mL三角瓶中加入99mL 0.9% NaCl （加20个左右的玻璃珠）； （2）250mL三角瓶中加入50mL 0.9% NaCl （作10倍稀释用）。 2.3仪器及器皿 （1）带螺帽试管5支； （2）牙签2支； （3）5mL及1mL吸头2支； （4）涂布棒2支； （5）5mL及1mL取液器各一支； （6）30℃和37℃培养箱； （7）接种环、酒精灯和火柴； （8）摇床。 （1）-（4）要求事先灭菌。 3.实验方法和步骤 3.1从土壤中分离和纯化微生物 （1）采土样 选择较肥沃的土壤，铲去表土层，挖5-20cm深度的或特殊要求的地方土壤数10g，装入灭过菌的牛皮纸袋内，封好袋口，做好编号记录，携回实验室供分离用。 （2）制备土壤稀释液 称取土样1.0g放入盛99mL无菌水并带有玻璃珠的三角瓶中，置摇床振荡5min使土样均匀分散在稀释液中成为土壤悬液（10-2）。用1mL的无菌吸头从中吸取0.5mL土壤悬液注入盛有4.5mL无菌水的试管中，吹吸3次，振荡混匀（10-3）。然后再用同一支1mL吸头，从此管中吸取0.5mL注入另一盛有4.5mL无菌水的试管中（10-4），依此类推制成10-5，10-6，10-7各种稀释度的土壤溶液。 3.2涂布 用一支1mL无菌吸头分别从稀释度10-7、10-6和10-5的土壤稀释液中各吸取0.1mL对号放入已写好稀释度的肉汤蛋白胨培养基平板上，用无菌玻璃涂棒在培养基表面轻轻地涂布均匀。涂布时从低浓度到高浓度分别在培养基表面轻轻地涂布，可转动皿底一定角度，继续涂布，直至均匀。每个浓度做3个平板。 3.3培养 将平板倒置于37℃温箱中培养48h。统计每个平板长出的平均菌落数。根据下面菌落计数方法，算出每克土壤中的细菌含量。 3.4菌落计数方法 先计算相同稀释度的平均菌落数。若其中一个培养皿有较大片菌苔生长时，则不应使用，而应以无片状菌苔生长的平皿作为该稀释度的平均菌落数。若片状菌苔的大小不到培养皿的一半，而其余的一半菌落分布又很均匀时，可将此一半的菌落数乘2以代表全部平皿的菌落数，然后再计算该稀释度的平均菌落数。 首先选择平均菌落数为30～300的平板，当只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时，则以该平均菌落数乘以其稀释倍数即为该样品中的微生物总数。 若有两个稀释度的平均菌落数为30～300，则按两者菌落总数之比值来决定。若其比值小于2，应采取两者的平均数: 若大于2，则取其中较少的菌落总数。 若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数。 若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数。 若所有稀释度的平均菌落数均不在30～300之间，则以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数。 例子 不同稀释度的平均菌落数 两个稀释度菌落数之比 菌落总数/个/mL 10-1,10-2,10-3 1 1365 164 20 16400或1.6×104 2 2760 295 46 1.6 37750或3.8×104 3 2890 271 60 2.2 27100或2.7×104 4 无法计数 1650 513 513000或5.1×105 5 27 11 5 270或2.7×102 6 无法计数 305 12 30500或3.1×104 |
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