| 查看: 1497 | 回复: 4 | |||
[求助]
求助重叠延伸PCR 已有1人参与
|
| 求助重叠延伸PCR的基本原理和方法 |
回复此楼» 猜你喜欢
含氟糖皮质激素的外用抗炎利器醋酸氟轻松
已经有0人回复
-
阿莫奈韦（Amenamevir）：解旋酶-引物酶靶向分子的结构特征与合成路径全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有249人回复
-
利瑞鲁单抗：靶向KIR的NK细胞检查点工具抗体，结构基础与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 求助重叠延伸pcr
已经有0人回复
- 请问如何使短DNA片段首尾相连增长为长片段？
已经有0人回复
- 重叠延伸PCR的高手，求助！！！！！
已经有24人回复
- 求助重叠延伸pcr
已经有5人回复
- 重叠延伸PCR引物合成求助
已经有15人回复
- 求助，急急急！重叠延伸PCR方法做定点突变
已经有0人回复
- 【求助/交流】求助重叠PCR的问题，有哪位高手能帮忙看看，不胜感激！
已经有1人回复
- 【求助/交流】重叠延伸
已经有2人回复
- 【求助/交流】重叠PCR的问题???
已经有7人回复
- 【求助/交流】急求文献一篇 谢谢
已经有3人回复
- 【求助/交流】关于PCR
已经有10人回复
- 【求助/交流】重叠延伸pcr第二轮条带较弱，弥散
已经有12人回复
Tintin77
木虫 (正式写手)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 2826.8
- 红花: 1
- 帖子: 550
- 在线: 42.6小时
- 虫号: 4157320
- 注册: 2015-10-19
- 性别: MM
- 专业: 食品加工技术
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ...
感谢参与，应助指数 +1
曲酒封琴: 金币+200, ★★★★★最佳答案, 好有帮助啊，受益匪浅。。。。 2015-11-17 14:06:01
感谢参与，应助指数 +1
曲酒封琴: 金币+200, ★★★★★最佳答案, 好有帮助啊，受益匪浅。。。。 2015-11-17 14:06:01
|
重叠延伸PCR技术(gene splicing by overlap extension PCR,简称SOE PCR)由于采用具有互补末端的引物,使PCR产物形成了重叠链,从而在随后的扩增反应中通过重叠链的延伸,将不同来源的扩增片段重叠拼接起来.此技术利用PCR技术能够在体外进行有效的基因重组,而且不需要内切酶消化和连接酶处理,可利用这一技术很快获得其它依靠限制性内切酶消化的方法难以得到的产物.重叠延伸PCR技术成功的关键是重叠互补引物的设计.重叠延伸PCR在基因的定点突变、融合基因的构建、长片段基因的合成、基因敲除以及目的基因的扩增等方面有其广泛而独特的应用。 以下是重叠延伸PCR的原理及两基因的引物设计： A基因： 上游（F1）与开放阅读框起始密码子附近的序列相对应，并在5 ’末端添加酶切位点和3个保护碱基；下游（R1）与A基因终止密码子附近的序列及B基因5’末端起始密码子附近的序列互补，并去除A基因的终止密码子TAA B基因： 上游（F2）与A基因终止密码子附近的序列及B基因5 ’端起始密码子附近的序列相对应，同样去除A基因终止密码子TAA；下游（R2）与B基因的开放阅读框终止密码子序列互补，并在5’末端添加酶切位点和2个保护碱基。 先分别用F1、R1，F2、R2扩增出A和B基因，然后再用F1和R2将两基因连接起来，得到融合基因。 外定点突变技术是研究蛋白质结构和功能之间的复杂关系的有力工具，也是我们在实验室中改造/优化基因常用的手段。而采用重叠引物PCR介导的定点突变实验是一种快速有效的在基因中特定位点引入特定突变的有效技术。该技术采用具有互补末端的引物，使PCR产物形成了重叠链, 从而在随后的扩增反应中通过重叠链的延伸，将不同来源的扩增片段重叠拼接起来。此技术利用PCR技术能够在体外进行有效的基因重组，而且不需要内切酶消化和连接酶处理，可利用这一技术很快获得其它依靠限制性内切酶消化的方法难以得到的产物。该技术主要包括以下几步：设计引物，PCR扩增基因两端，回收两端片段，两端片段退火延伸，扩增全长基因。 |
2楼2015-11-17 14:05:03
|
。。。。。。 |
3楼2015-11-17 14:09:42
4楼2016-10-22 11:21:09
Tintin77
木虫 (正式写手)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 2826.8
- 红花: 1
- 帖子: 550
- 在线: 42.6小时
- 虫号: 4157320
- 注册: 2015-10-19
- 性别: MM
- 专业: 食品加工技术
5楼2016-10-28 22:55:54
