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Esther_zhang

新虫 (初入文坛)

[求助] 质粒线性化和纯化步骤已有1人参与

虫友们,我做转染前想把质粒先用一个酶切位点线性化,不知道具体该如何操作,酶切位点是平末端的,要不要去磷酸化?
还有,如何纯化适合做后续的转染?
谢谢大家了,如果有具体的操作步骤,那更是极好的。
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铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

做个去磷酸化处理还是比较保险的,我们实验室情况来看,NEB的酶去磷酸化效果比较好点。单酶切线性化自连的情况还是挺常见的。如果要是转染的话,后续纯化还是应当注意些,DNA要是不够纯怕是会影响细胞生长的吧。
呵呵
8楼2015-11-27 15:36:25
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Esther_zhang

新虫 (初入文坛)

不要沉,自己顶一下。大家帮帮忙。
2楼2015-11-17 13:02:58
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Esther_zhang

新虫 (初入文坛)

为什么没有人回复我
3楼2015-11-18 13:53:07
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15853830932

木虫 (小有名气)

如果你想做去磷酸化也可以。这样保险点,其实自连不是很多的。酶切完你做个清洁,把盐离子等物质洗脱掉就可以做转化了。

发自小木虫Android客户端
If you shed tear when you miss the sun, you also miss the stars.
4楼2015-11-18 16:36:19
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