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菱紫369

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[求助] PCR后跑电泳有二聚体和模板条带没有目的条带为什么已有3人参与

求前辈们帮忙，PCR后跑电泳有二聚体和模板条带没有目的条带为什么，我用的引物和程序和之前都是一样的，只是模板DNA是重新提的，急急急急，请路过的前辈稍停脚步指导一二

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1楼 2015-11-12 20:20:39

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梅林616

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【答案】应助回帖

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5楼: Originally posted by 菱紫369 at 2015-11-17 09:35:43
我平时用的是1%的胶，跑的DNA看上去没什么问题，我用别的引物p了，出了条带，感觉是引物问题，用0.6%和1%的胶有什么区别吗？

...

胶浓度小适合分离大片段，浓度大时分离多个小片段

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8楼2015-11-17 09:44:02

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xushiqi001

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可能是你模版的问题，重提一次，跑胶看看，如果还不行，重新设计引物吧。

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2楼2015-11-12 22:08:01

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总有二狗咬朕

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【答案】应助回帖

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1.那应该不是电泳问题，还是看看你的目的基因有没有表达出来。
2.再看看模板。
3.不行就是引物不对。

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我好累，承受这个年纪不该有的帅！

3楼2015-11-13 09:44:07

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zlaosan2

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应该是模板问题，，建议用0.6%的胶跑一次总DNA电泳看看

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4楼2015-11-13 09:59:23

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菱紫369

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4楼: Originally posted by zlaosan2 at 2015-11-13 09:59:23
应该是模板问题，，建议用0.6%的胶跑一次总DNA电泳看看

我平时用的是1%的胶，跑的DNA看上去没什么问题，我用别的引物p了，出了条带，感觉是引物问题，用0.6%和1%的胶有什么区别吗？

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5楼2015-11-17 09:35:43

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菱紫369

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2楼: Originally posted by xushiqi001 at 2015-11-12 22:08:01
可能是你模版的问题，重提一次，跑胶看看，如果还不行，重新设计引物吧。

DNA重提了好几次了，在出和不出之间停电停了3天，对引物会不会有影响呢？

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6楼2015-11-17 09:38:03

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菱紫369

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3楼: Originally posted by 总有二狗咬朕 at 2015-11-13 09:44:07
1.那应该不是电泳问题，还是看看你的目的基因有没有表达出来。
2.再看看模板。
3.不行就是引物不对。

停电，-20冰箱化了，对引物有没有影响ne ?

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7楼2015-11-17 09:40:12

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7楼: Originally posted by 菱紫369 at 2015-11-17 09:40:12
停电，-20冰箱化了，对引物有没有影响ne ?

...

引物反复冻融一两次问题不大

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9楼2015-11-17 09:45:03

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6楼: Originally posted by 菱紫369 at 2015-11-17 09:38:03
DNA重提了好几次了，在出和不出之间停电停了3天，对引物会不会有影响呢？

...

应该没问题。

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菱紫369

10楼2015-11-17 10:31:34

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