24小时热门版块排行榜    

查看: 1924  |  回复: 9
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

小二郎

铜虫 (初入文坛)

[求助] 紧急求助~PCR产物电泳条带,特别奇怪,LZ好崩溃,,跪求各位提供帮助 已有2人参与

各位好~~小妹新手在此求助
打算做qPCR标准品,现在用qPCR引物做普通PCR,扩增条件95℃8min,(95℃ 30s /55℃ 30S / 72℃ 30S )35个循环,72 10min,体系takra premix Taq(Ex taq verson 2.0)10u /正反引物(10mM)各1u/模版1u,电泳条带有两条,还算清晰,但并不是目的条带,其实目的条带只有100多bp, 条带居然有1000多bp,提高退火温度到60℃,条带也是这样的,空白对照除了引物并没有其它条带,请各位帮忙分析下原因,有没有人遇到这种情况?  还有一开始以为是引物合成错了,重新合成了一份,条带依然是这样的,我实在没辙了,,引物是采用文献里面的,很多外文文献都用过。。。。我的模版DNA是海水全基因组DNA
  附电泳图  marker是DL2000
图1 胶孔依次是marker/sample1/blank
图2 胶孔依次是marker/sample1/sample2

紧急求助~PCR产物电泳条带,特别奇怪,LZ好崩溃,,跪求各位提供帮助
图片1.jpg


紧急求助~PCR产物电泳条带,特别奇怪,LZ好崩溃,,跪求各位提供帮助-1
图片2.jpg
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

534720018

至尊木虫 (著名写手)

你的引物是自己设计的还是用的别人文献里的?...

发自小木虫IOS客户端
7楼2015-11-11 23:52:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

zhangjingwjs

新虫 (小有名气)

你确定Dna模版没有被污染吗,怎么感觉被细菌DNA污染了呢,所以才会有1000多的条带

发自小木虫IOS客户端
2楼2015-11-11 20:42:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小二郎

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by zhangjingwjs at 2015-11-11 20:42:02
你确定Dna模版没有被污染吗,怎么感觉被细菌DNA污染了呢,所以才会有1000多的条带

我的样品是环境样品,不是纯菌株样品,DNA模版是是环境微生物基因组,,,被污染了才会有1000多的条带是什么因果关系?
3楼2015-11-11 20:45:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

我爱罗的风沙

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+3, 鼓 2015-11-11 22:58:02
楼主你好。你看你从基因组里面P出了很多条带,但是没有目的条带,这说明了一个事实:你设计的引物的特异性不够好,所以才能P出非特异性的条带。目的条带没有P出来,可能是因为:①退火温度不正确,虽然说是要TM减5-10度,但是具体温度需要自己摸索,建议拉一个温度梯度。②楼主之后72度 10分钟我认为这是不正确的,可以尝试循环后保持4度或者直接取出产物。
Kyle, Ph.D Candidate. Dep.Basic medical science,School of Medicine, Tsinghua University. Beijing, China,PostCode:100084
4楼2015-11-11 22:18:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[博后之家] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 5/250 2026-08-29 21:33 by 4qO8zhfjr2AX
[找工作] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 5/250 2026-08-29 21:33 by 4qO8zhfjr2AX
[基金申请] 面上意见出来了 +8 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 16/800 2026-08-29 20:45 by 黄鸟于飞Chao
[论文投稿] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 3/150 2026-08-29 18:26 by 4FFAWE8HcgUD
[公派出国] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 6/300 2026-08-29 17:30 by 4FFAWE8HcgUD
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 4/200 2026-08-29 13:51 by jCd0dEvKHShX
[考研] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 6/300 2026-08-29 11:40 by jCd0dEvKHShX
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗? +3 349506619 2026-08-28 3/150 2026-08-29 10:49 by 木风9012
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 2026年叶企孙基金 +4 bud_bud 2026-08-27 7/350 2026-08-29 07:23 by foolishmani
[基金申请] 系统查不到 +11 董八千 2026-08-26 11/550 2026-08-28 18:06 by Leogzhya
[基金申请] 基金不中,共勉 +11 eulota 2026-08-26 11/550 2026-08-28 14:22 by 火星超人xi
[基金申请] 怎么查啊 +6 huang1991js 2026-08-26 6/300 2026-08-28 08:42 by winsaint
[基金申请] 面上合作单位盖章 +5 ssyjh 2026-08-27 5/250 2026-08-27 20:50 by gdfollow
[基金申请] 申请删除本帖 +6 lyz123lyz 2026-08-27 7/350 2026-08-27 17:31 by 宁静致远sy
[文学芳草园] 梦想 +3 myrtle 2026-08-26 3/150 2026-08-27 10:01 by angelyueyi
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 国合现在查不到了吗? +10 chengyan1220 2026-08-24 20/1000 2026-08-26 08:57 by peasantsprig
[基金申请] 某些机构,以效率低为荣,以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑,不妨来听听这首《基金之外》 +8 scalable 2026-08-24 8/400 2026-08-25 12:52 by jnhyjjm
信息提示
请填处理意见