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雨停了20

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 啦啦啦大胖子 at 2015-11-11 20:31:02
转膜,封闭,抗体孵育过程中都可能产生气泡,在这个过程中一定要避免气泡的产生。
1.转膜的时候可以用一次性涂布棒之类的东西赶走气泡;
2.封闭,抗体孵育的时候,如果是液体很多的话,基本不会有气泡产生,如果液 ...

封闭是用50mL脱脂牛奶在摇床进行的,封闭这一步应该没有问题。转膜的时候也有用塑料刮刮了几下,孵育抗体的时候是用杂交袋进行的。可能最容易出现问题的就是转膜和抗体孵育这两步了吧
11楼2015-11-12 16:56:34
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雨停了20

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 铿锵爪神 at 2015-11-11 21:18:59
一般我铺滤纸和膜还有胶神马的时候都是拿盆泡在转膜液里面铺的,这样很不容易出气泡

我也是用平皿泡起的,下次准备再多倒点缓冲液,尽量浸泡。
12楼2015-11-12 17:26:20
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唯不忘相思

金虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 雨停了20 at 2015-11-12 14:29:40
转膜的时候我是先用甲醇活化膜15S左右,然后放入转膜缓冲液中平衡5min,将膜放在胶上后用塑料板子刮了几下,放上滤纸后也刮了几下。想请问一下,用夹子夹好后在转膜缓冲液体系里面,还有形成气泡的可能吗?就是说已 ...

先用甲醇活化说明你用的是PVDF膜。将膜放在胶上之前可以先在膜上再倒一点转膜缓冲液,然后再轻轻放上润湿过的膜,其实你多转几次可以细心发现,要是此时胶和膜间有气泡是肉眼一般能分辨出来的,如果确定此时已经将气泡赶出,在夹子夹好了转膜中一般是不会形成气泡的。
13楼2015-11-12 20:51:57
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shengliding

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

上面的都说得很多了,甲醇了,赶气泡了等都是必要的,最关键的是要把滤纸(如果是湿转,还要先把海绵夹垫放入)、膜和胶依次放到转膜液中(全浸在液下),这时转膜液要多一点儿,好操作,把膜和胶放在中央,膜胶对正位,在液中使彼此贴上(之间不会有气泡的),从底层慢慢拖起,放在夹上(湿转)或板上,再用玻棒轻轻推赶使胶和膜贴紧,然后胶上再加点儿液体,再铺层滤纸,再赶,夹上即可。一定不会有气泡的!顺祝你从此告别气泡!
14楼2015-11-15 00:27:14
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