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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » WB条带有气泡是什么原因引起的？如何避免？
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雨停了20

新虫 (初入文坛)
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4楼: Originally posted by 啦啦啦大胖子 at 2015-11-11 20:31:02
转膜，封闭，抗体孵育过程中都可能产生气泡，在这个过程中一定要避免气泡的产生。
1.转膜的时候可以用一次性涂布棒之类的东西赶走气泡；
2.封闭，抗体孵育的时候，如果是液体很多的话，基本不会有气泡产生，如果液 ...

封闭是用50mL脱脂牛奶在摇床进行的，封闭这一步应该没有问题。转膜的时候也有用塑料刮刮了几下，孵育抗体的时候是用杂交袋进行的。可能最容易出现问题的就是转膜和抗体孵育这两步了吧
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11楼2015-11-12 16:56:34
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雨停了20

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 铿锵爪神 at 2015-11-11 21:18:59
一般我铺滤纸和膜还有胶神马的时候都是拿盆泡在转膜液里面铺的，这样很不容易出气泡

我也是用平皿泡起的，下次准备再多倒点缓冲液，尽量浸泡。
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12楼2015-11-12 17:26:20
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唯不忘相思

金虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 雨停了20 at 2015-11-12 14:29:40
转膜的时候我是先用甲醇活化膜15S左右，然后放入转膜缓冲液中平衡5min，将膜放在胶上后用塑料板子刮了几下，放上滤纸后也刮了几下。想请问一下，用夹子夹好后在转膜缓冲液体系里面，还有形成气泡的可能吗？就是说已 ...

先用甲醇活化说明你用的是PVDF膜。将膜放在胶上之前可以先在膜上再倒一点转膜缓冲液，然后再轻轻放上润湿过的膜，其实你多转几次可以细心发现，要是此时胶和膜间有气泡是肉眼一般能分辨出来的，如果确定此时已经将气泡赶出，在夹子夹好了转膜中一般是不会形成气泡的。
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13楼2015-11-12 20:51:57
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shengliding

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

上面的都说得很多了，甲醇了，赶气泡了等都是必要的，最关键的是要把滤纸（如果是湿转，还要先把海绵夹垫放入）、膜和胶依次放到转膜液中（全浸在液下），这时转膜液要多一点儿，好操作，把膜和胶放在中央，膜胶对正位，在液中使彼此贴上（之间不会有气泡的），从底层慢慢拖起，放在夹上（湿转）或板上，再用玻棒轻轻推赶使胶和膜贴紧，然后胶上再加点儿液体，再铺层滤纸，再赶，夹上即可。一定不会有气泡的！顺祝你从此告别气泡！
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14楼2015-11-15 00:27:14
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