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[求助]
hiTAIL-PCR求指导
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在下正在利用hiTAIL-PCR克隆玉米自交系中一段未知序列，参考的是刘耀光老师2007年发表的文章，首先利用B73参考基因对反应条件进行摸索。 LAD primer序列分别为：LAD1：ACGATGGACTCCAGAGCGGCCGCANANNNGGAA; LAD2: ACGATGGACTCCAGAGCGGCCGCTNTNNNGGTT; LAD3：ACGATGGACTCCAGAGCGGCCGCAGNANNCCAA; LAD4：ACGATGGACTCCAGAGCGGCCGCGANTNNNCGGT。 基因特异引物l利用Primer3.0分析Tm>68，序列如下：GSP1：TTAGTCCCAATGCAAACCGAGCCACTAAGC, GSP1：ACGATGGACTCCAGTCCGGCCGCACTTAGCAGTGCTGGTCTCAGTGG; GSP3：GAGTTCTCTTAGATCCGGCGCCATTGCCTG。 PCR反应体系及程序与刘老师文章里一致，1%琼脂糖电泳如下图所示，求各位大侠指导，问题可能出在哪里，该如何改进，不胜感激！拜谢各位  hiTAIL-PCR B73.jpg |
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