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faile18

金虫 (小有名气)

[求助] hiTAIL-PCR求指导

在下正在利用hiTAIL-PCR克隆玉米自交系中一段未知序列，参考的是刘耀光老师2007年发表的文章，首先利用B73参考基因对反应条件进行摸索。
LAD primer序列分别为：LAD1：ACGATGGACTCCAGAGCGGCCGCANANNNGGAA; LAD2: ACGATGGACTCCAGAGCGGCCGCTNTNNNGGTT; LAD3：ACGATGGACTCCAGAGCGGCCGCAGNANNCCAA;  LAD4：ACGATGGACTCCAGAGCGGCCGCGANTNNNCGGT。
基因特异引物l利用Primer3.0分析Tm>68，序列如下：GSP1：TTAGTCCCAATGCAAACCGAGCCACTAAGC, GSP1：ACGATGGACTCCAGTCCGGCCGCACTTAGCAGTGCTGGTCTCAGTGG; GSP3：GAGTTCTCTTAGATCCGGCGCCATTGCCTG。

PCR反应体系及程序与刘老师文章里一致，1%琼脂糖电泳如下图所示，求各位大侠指导，问题可能出在哪里，该如何改进，不胜感激！拜谢各位

hiTAIL-PCR求指导
hiTAIL-PCR B73.jpg
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1楼 2015-11-09 13:46:07
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yiner

新虫 (初入文坛)
★
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-10-07 08:28:49
请问楼主最后是怎么解决的，我现在也出现了这个问题，求解！
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fighting!!!!
2楼2016-10-06 20:38:05
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15836073150

金虫 (小有名气)
请问楼主现在做出来了吗，我也在做这，扩是扩出来了，可是扩出来的是前面的内含子，没有扩到启动子。
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3楼2016-10-12 11:40:45
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