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18273176704

新虫 (初入文坛)

[求助] pcr出来亮带了,但不是目的条带,什么原因。还可以送去测测序吗还是mark的问题啊 已有3人参与

普通pcr。2xEasy  Mix  混合做的。做了一个梯度,50.52.54.56.58.60.都单一亮带,但是我的目的条带在1300bp左右,单一亮带在1000以内。。这种情况可能是什么原因啊,新手请求大神们指导。。感谢。

pcr出来亮带了,但不是目的条带,什么原因。还可以送去测测序吗还是mark的问题啊
PCR11.02.jpg
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铭记那些不可回首。。。相信自己。。。
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陈爱中

新虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 18273176704 at 2015-11-04 08:24:58
引物只有三个连续碱基互补,应该没问题吧,用primer设计的时候,打分挺好的。。。我应该怎么检查啊...

你设计的引物是卡你目的基因两端的,也许引物不仅可以互补两端,在你目的基因内部也有互补位点,这样就造成你扩增片段比你预期要短了啊。
11楼2015-11-04 12:13:49
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wcq吴超群

新虫 (小有名气)

会不会是引物的问题,引物有错?

发自小木虫Android客户端
2楼2015-11-03 20:20:42
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18273176704

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by wcq吴超群 at 2015-11-03 20:20:42
会不会是引物的问题,引物有错?

我是对比了几种鱼的同源序列,在保守片段设计的引物。。用prim设计的。
铭记那些不可回首。。。相信自己。。。
3楼2015-11-03 21:27:48
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咖啡豆G

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-11-03 23:02:56
重新做个温度梯度试试,条带不对应该不是marker的问题,也不用送去测序吧,直到条带在目的大小附近了再测序吧
4楼2015-11-03 21:45:42
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