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Stridegogogo

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小可爱

[求助] 引物设计中的信号肽问题,是从信号肽开始还是从CDS的第一个碱基开始? 已有1人参与

设计引物时应该从第一个碱基开始还是从信号肽开始,还是从CDS的第一个碱基开始?
如一个序列 CDS 序列是 57~560, sig_peptide 从 57~119, mat_peptide 从 120~557。应该从第几个开始设计?从第121个开始?
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分子克隆与蛋白结晶
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Stridegogogo

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小可爱

引用回帖:
2楼: Originally posted by sonny at 2015-10-29 10:59:08
看你的需求了,如果你需要表达的蛋白在细胞内自己加工成熟,就从57号位开始设计,如果你只是需要表达成熟后的蛋白,就从120位开始设计!但是很多蛋白都是要定位到特定区域,经过剪切成熟后才发挥功能,所以有时候信 ...

谢谢楼主!我这个酶确实需要翻译后修饰,在内质网上,那我是不是就必须加上信号肽设计引物了?这样的话还可以通过破碎细胞的方法获得目的蛋白吗?它会不会在大肠中表达的时候由于带着信号肽而转移到胞外呀
分子克隆与蛋白结晶
4楼2015-10-30 09:54:05
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sonny

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感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰,手有余香,非常感谢。 2015-10-30 21:21:50
看你的需求了,如果你需要表达的蛋白在细胞内自己加工成熟,就从57号位开始设计,如果你只是需要表达成熟后的蛋白,就从120位开始设计!但是很多蛋白都是要定位到特定区域,经过剪切成熟后才发挥功能,所以有时候信号肽很重要,你而不是表达出成熟的蛋白就可以发挥功能这么简单。当然,还是需要通过文献和你自己的实验目的来确定!

发自小木虫Android客户端
2楼2015-10-29 10:59:08
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sonny

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰,手有余香,分子生物期待您更多精彩。 2015-10-30 21:21:56
当然,无论怎样,别忘了起始和终止密码子,所在哺乳动物细胞内做表达,需要在5'端加入Kozak序列: GCCACCATGG.  ATG为起始密码子!

发自小木虫Android客户端
3楼2015-10-29 11:03:50
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Stridegogogo

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小可爱

引用回帖:
3楼: Originally posted by sonny at 2015-10-29 11:03:50
当然,无论怎样,别忘了起始和终止密码子,所在哺乳动物细胞内做表达,需要在5'端加入Kozak序列: GCCACCATGG.  ATG为起始密码子!

大神 我的这个蛋白是细菌里的,但是它需要在内质网上翻译后修饰唉,可是我将它表达在大肠中,那我是不是应该设计引物的时候需要带着信号肽啊。。。要不然它怎样修饰成成熟蛋白呢,可问题又来了,在大肠中可以修饰它吗
分子克隆与蛋白结晶
5楼2015-10-30 10:13:59
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