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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 为什么我做出来的细菌V3区通用引物338，518，PCR扩增出来的片段是100bp?
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runye2015

新虫 (小有名气)

[交流] 为什么我做出来的细菌V3区通用引物338，518，PCR扩增出来的片段是100bp?

如题，
以下是引物序列
16SrDNA 338F:CGCCCGCCGCGCGCGGCGGGCGGGGCGGGGGCACGGGGGG(GC夹) CCTACGGGAGGCAGCAG
               518R:ATTACCGCGGCTGCTCC
1、1.5%的琼脂糖，120V 30分钟，
2、下图是引物刚刚合成以后做的温度PCR，中间为 MARKER 500-25BP 依次是 500 400 300 200 150 100 75 50 25 ，最亮的为200bp
根据灰度值确定最佳的退火温度为62度，但是所有的温度对应的条带都在100bp左右。
3、正常应该是多大呢？是引物序列的问题吗？
求各位大神指点！万分感谢！

为什么我做出来的细菌V3区通用引物338，518，PCR扩增出来的片段是100bp?
细菌V3通用引物228,518 温度梯度PCR.jpg
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1楼2015-10-28 16:48:18
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wangneal

新虫 (初入文坛)
上样多少

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runye2015
4楼2015-10-28 23:27:39
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runye2015

新虫 (小有名气)
请各位大神帮忙！不胜感激！！谢谢啦！

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2楼2015-10-28 22:41:14
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runye2015

新虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by wangneal at 2015-10-28 23:27:39
上样多少

上样量20微升～

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5楼2015-10-29 07:19:50
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runye2015

新虫 (小有名气)
好吧

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6楼2015-10-29 22:45:05
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