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runye2015

新虫 (小有名气)

[交流] 为什么我做出来的细菌V3区通用引物338,518,PCR扩增出来的片段是100bp?

如题,
以下是引物序列
16SrDNA 338F:CGCCCGCCGCGCGCGGCGGGCGGGGCGGGGGCACGGGGGG(GC夹) CCTACGGGAGGCAGCAG
               518R:ATTACCGCGGCTGCTCC
1、1.5%的琼脂糖,120V 30分钟,
2、下图是引物刚刚合成以后做的温度PCR,中间为 MARKER 500-25BP 依次是 500 400 300 200 150 100 75 50 25 ,最亮的为200bp
根据灰度值确定最佳的退火温度为62度,但是所有的温度对应的条带都在100bp左右。
3、正常应该是多大呢?是引物序列的问题吗?
求各位大神指点!万分感谢!

为什么我做出来的细菌V3区通用引物338,518,PCR扩增出来的片段是100bp?
细菌V3通用引物228,518 温度梯度PCR.jpg
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wangneal

新虫 (初入文坛)

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4楼2015-10-28 23:27:39
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runye2015

新虫 (小有名气)

请各位大神帮忙!不胜感激!!谢谢啦!

发自小木虫Android客户端
2楼2015-10-28 22:41:14
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runye2015

新虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by wangneal at 2015-10-28 23:27:39
上样多少

上样量20微升~

发自小木虫Android客户端
5楼2015-10-29 07:19:50
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runye2015

新虫 (小有名气)

6楼2015-10-29 22:45:05
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