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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 非变性聚丙烯酰胺电泳染色
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欢开无语

新虫 (初入文坛)

[求助] 非变性聚丙烯酰胺电泳染色 已有3人参与

请问各位大侠，我电泳的胶，染色后倒入显色液的瞬间就全部变黑了是怎么回事呢，重新试过几次，还是一样的效果，这个什么原因导致的？？？？请教一下大家啊，实在是不知道原因。:

非变性聚丙烯酰胺电泳染色
201408101436503082.jpg
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1楼 2015-10-25 20:51:58
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欢开无语

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 杜仲谷 at 2015-10-27 23:01:05
我觉得可能是银染液重复使用，每次都加1mL甲醛导致的
...

我的银染液一般都只用一次的

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11楼2015-10-28 00:00:50
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凡人凡语1

新虫 (小有名气)
银浓度高了

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2楼2015-10-25 21:05:46
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凡人凡语1

新虫 (小有名气)
染色后有没有用蒸馏水漂洗5-6″秒

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3楼2015-10-25 21:07:56
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欢开无语

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 凡人凡语1 at 2015-10-25 21:07:56
染色后有没有用蒸馏水漂洗5-6″秒

应该不是染色液配浓了，我之前一直用的一样的浓度，没有问题，也漂洗过，这是今天的，把显色的药品全换成新的了，还是一样的结果
非变性聚丙烯酰胺电泳染色-1



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4楼2015-10-26 18:50:27
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杜仲谷

木虫 (职业作家)

金虫

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
银染时间太长了，您不妨试试缩短点时间

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从事分生的药学生
5楼2015-10-26 22:38:33
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mzjfriend

木虫 (小有名气)
一、银染前准备
1. 银染水质很重要，最好全部双蒸水或去离子水。
2. 装胶的器皿清晰干净，最后双蒸水多冲几遍。
3. 操作时戴手套，不然gel上会有大手印。
4. 跑胶时我采用大梳子，小样本量。因为银染本身分辨率就很高，样本量太大时杂带太浓。小梳子的条带比较模糊。如图

二、银染过程
1. 电泳结束后，自来水冲洗玻璃板两面，预冷，剥下凝胶，双蒸水洗涤两次。
2. 浸没于0.1% 的AgNO3溶液中，摇床银染10分钟。
注意事项：
a. 时间。银染时间可延迟到15分钟，但是千万不要超过20分钟，否则胶的背景极深，一个字，丑。
b.浓度。硝酸银溶液浓度不宜超过0.15%，我的经验表明，AgNO3浓度越高，胶越黄越丑。
3. 双蒸水冲洗两次，1min。
注意事项：
a. 充分的漂洗可以降低背景色。因此漂洗时间一定要到1min
4. 浸没于1.2% NaOH+ 0.4% 甲醛溶液中显影，看到模糊的条带后立即大量双蒸水冲洗，中止显影。

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把自己变得更好，才能吸引更好的人！
6楼2015-10-26 23:12:31
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欢开无语

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 杜仲谷 at 2015-10-26 22:38:33
银染时间太长了，您不妨试试缩短点时间

时间一直是15分钟，之前也是这么长时间，为何突然就不行了？

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7楼2015-10-27 14:24:45
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tonganlhy

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1.跑胶的缓冲液必需是新配的
2.硫代硫酸钠敏化以及银染时间控制一下
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8楼2015-10-27 22:03:00
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杜仲谷

木虫 (职业作家)

金虫

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by mzjfriend at 2015-10-26 23:12:31
一、银染前准备
1. 银染水质很重要，最好全部双蒸水或去离子水。
2. 装胶的器皿清晰干净，最后双蒸水多冲几遍。
3. 操作时戴手套，不然gel上会有大手印。
4. 跑胶时我采用大梳子，小样本量。因为银染本身分辨率就很 ...

我觉得可能是银染液重复使用，每次都加1mL甲醛导致的

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从事分生的药学生
9楼2015-10-27 23:01:05
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杜仲谷

木虫 (职业作家)

金虫

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by 欢开无语 at 2015-10-27 14:24:45
时间一直是15分钟，之前也是这么长时间，为何突然就不行了？
...

这么深的背景，我们想到的就是您的胶在银染时，银染时间长了。

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从事分生的药学生
10楼2015-10-27 23:02:41
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