应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于Hind II 与Xho I酶切连接的问题，求大神指导
51/1返回列表
查看: 3657  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

天宇201266

金虫 (正式写手)

[求助] 关于Hind II 与Xho I酶切连接的问题，求大神指导 已有6人参与

本人做Hind III与Xho I 的双酶切连接，一直没有做成，做了将近5个月了，自己将近机关算尽还是没有做出来，现想各位大神求助。现将自己的情况描述如下，自己通过PCR扩增，来获得目的片段510bp，获得的目的片段两端5'是Xho I 酶切位点，3'是Hind III酶切位点，而所要连得载体是pET-28a（之前已经插入一个启动子共5610bp），分别用Hind II 与Xho I双酶切载体与片段，
   双酶切体系是：  目的片段/载体：5 ul
                           10x M buffer   :   1ul
                           Hind III/Xho I  :    0.5ul
                           ddH2O         ：3ul
酶切之后的胶回收之后的跑胶电泳图如图片1
  酶切连接之后的单双酶切验证的体系是：
      双酶切验证   ：质粒             ：5 ul                                     Hind III 单酶切验证 ：质粒：5 ul           Xho I 单酶切验证：质粒：5 ul
                           10x K buffer   :   1ul                                                          10x K buffer   :   1ul                            10x K buffer   :   1ul
                           Hind III/Xho I  :    0.5ul                                                        Hind III  :    0.5ul                                      Xho I :    0.5ul
                           ddH2O         ：3ul                                                                ddH2O         ：3.5ul                             ddH2O         ：3.5ul
单双酶切验证的图片如图2和如图3，图2与图3分别对应于同一个质粒。自己做酶切连接跟酶切验证的结果一直是这样，求各位大神指导，该如何设置片段与载体的比例？如何做酶切连接的体系，谢谢！

关于Hind II 与Xho I酶切连接的问题，求大神指导
图片1.jpg


关于Hind II 与Xho I酶切连接的问题，求大神指导-1
图片2，Hind III 单酶切以及 Hind III +Xho I双酶切验证，从右向左一次是单双酶切.jpg


关于Hind II 与Xho I酶切连接的问题，求大神指导-2
图片3，Xho I 单酶切以及 Hind III +Xho I双酶切验证，从左向右一次是双单酶切.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢
在路上。。。
1楼 2015-10-16 13:53:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wxb2061

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by Eternity宇 at 2015-10-16 18:36:10
用这个吧，效果挺好的

...

一直不明白，载体和片段，他们质量ng是怎么确定的

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
走在途中……
6楼2015-10-16 23:25:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 14 个回答

tolobio

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

商家已经主动声明此回帖可能含有宣传内容
★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 请勿刷应助指数，已经看到您很多次无用的应助了。谢谢你的理解与配合。 2015-10-16 20:21:18
天宇201266: 金币+1, 老板不会同意的 2015-10-17 20:41:23
建议还是送到公司来做吧，比较省事，价格也不贵，做不出还不收费：http://www.tolobio.com/service_detail.php?id=110
相亲咨询：support@tolobio.com
赞一下 回复此楼
2楼2015-10-16 15:39:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wxb2061

银虫 (小有名气)
同样求助片段与载体比例的问题

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
走在途中……
3楼2015-10-16 18:19:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Eternity宇

禁虫 (著名写手)
本帖内容被屏蔽
4楼2015-10-16 18:36:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 14 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[教师之家] 课题组会帮你通过考核么？ +3 好运来～9527 2026-10-10 6/300 2026-10-12 14:55 by 简单化xn
[有机交流] OpenAI又攻克数学难题了，离AI做有机合成还有多远？ +4 wangyl_123 2026-10-10 7/350 2026-10-12 14:47 by chuans0923
[公派出国] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:34 by XQNyDCa1Tk5n
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:15 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 22:11 by XQNyDCa1Tk5n
[教师之家] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:06 by XQNyDCa1Tk5n
[基金申请] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:06 by XQNyDCa1Tk5n
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 14:25 by VOMexwnDzOFZ
[教师之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 (EPI+-1)(金币-50) +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 14:05 by VOMexwnDzOFZ
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:51 by VOMexwnDzOFZ
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:45 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:54 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:34 by VOMexwnDzOFZ
[考博] 招收博士生一名 +3 mandolin 2026-10-10 3/150 2026-10-11 10:21 by 不是山谷！
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 4/200 2026-10-11 03:14 by M0zrYVSAnxpE
[有机交流] 各位大佬，路线设计求助 +6 zapen 2026-10-08 8/400 2026-10-10 15:59 by zapen
[基金申请] 入职后第一次管课题组的专利缴费，对账才发现官费比别人多掏了一倍 +5 13108017953 2026-10-08 5/250 2026-10-10 11:15 by wdwd123
[有机交流] 我应该选哪条合成路线让实验成功率高一些？ +5 jing816y 2026-10-08 9/450 2026-10-10 09:05 by zapen
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭