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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 培养/筛选 » 关于大肠杆菌同源重组敲除基因的问题——请大家赐教！
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LYforever

新虫 (小有名气)

[求助] 关于大肠杆菌同源重组敲除基因的问题——请大家赐教！ 已有5人参与

最近在做大肠杆菌的基因缺失，用的是Red同源重组系统，一次重组已经完成，并测序正确，但最近一直卡在二次重组，每次电转后涂布到A+C的平板上（傍晚），第二天早上就会发现平板上长一层菌苔，涂布棒涂到的地方整个一片，已经重复做了很多次，但还是同样的问题，一直都不知道问题到底出在哪里，不知道如何是好，恳请前辈们赐教！
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1楼 2015-10-15 21:56:56
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LYforever

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 专吃虫 at 2015-10-16 07:29:44
大肠长得太快了，你不应该过夜的，培养几个小时就行了，本来涂布就有很多菌了，再长那么快肯定成菌台了

毕竟是筛选重组菌，效率不高的，不可能那一片菌苔都是阳性重组子啊

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9楼2015-10-18 21:53:24
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专吃虫

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
大肠长得太快了，你不应该过夜的，培养几个小时就行了，本来涂布就有很多菌了，再长那么快肯定成菌台了

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2楼2015-10-16 07:29:44
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mlanqiang

木虫之王 (文学泰斗)

蓝博士

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
培养时间短一点看看。
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蓝精灵
3楼2015-10-16 08:10:03
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胡亚梅

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
把菌的浓度降低一点，培养时间缩短。建议重新更换抗生素，感觉有抗生素失效的可能性
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小虫虫~~
4楼2015-10-16 08:42:12
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