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LYforever

新虫 (小有名气)

[求助] 关于大肠杆菌同源重组敲除基因的问题——请大家赐教! 已有5人参与

最近在做大肠杆菌的基因缺失,用的是Red同源重组系统,一次重组已经完成,并测序正确,但最近一直卡在二次重组,每次电转后涂布到A+C的平板上(傍晚),第二天早上就会发现平板上长一层菌苔,涂布棒涂到的地方整个一片,已经重复做了很多次,但还是同样的问题,一直都不知道问题到底出在哪里,不知道如何是好,恳请前辈们赐教!
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LYforever

新虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 老蔡文 at 2015-10-18 17:10:13
第一次的pCP20没cure掉?

第一次用的pKD46

发自小木虫IOS客户端
6楼2015-10-18 21:50:50
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查看全部 14 个回答

专吃虫

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
大肠长得太快了,你不应该过夜的,培养几个小时就行了,本来涂布就有很多菌了,再长那么快肯定成菌台了

发自小木虫Android客户端
2楼2015-10-16 07:29:44
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mlanqiang

木虫之王 (文学泰斗)

蓝博士

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
培养时间短一点看看。
蓝精灵
3楼2015-10-16 08:10:03
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胡亚梅

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
把菌的浓度降低一点,培养时间缩短。建议重新更换抗生素,感觉有抗生素失效的可能性
小虫虫~~
4楼2015-10-16 08:42:12
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