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新虫 (初入文坛)

[求助] 内源mRNA与外源mRNA的识别

做诱导iPS的实验,重编程之后用RT-PCR检测内源和外源SOX2和OCT4的表达情况
这里是怎么识别mRNA是外源基因转录出来的还是内源基因转录出来的呢?

文献是Okita用Episomal plasmid转染的那篇,我上传到附件里了
文献里提到的是用特异性的primer来识别内源或外源的,但是也只是一句话提到。。。

自己也做过一些搜索,看到说在目的基因加上tag可以区别内源或外源,但是个人理解这个tag主要是在蛋白水平的识别,去Addgene上查了一下,这3个质粒都没有tag

自己想了一下,要利用内源转录的mRNA和外源转录的mRNA序列上的差异来设计引物
但是表达的蛋白是一样的,那CDS区域应该是一样的,所以有差别的可能是UTR区域
不知道这个想法对不对

因为目前完全没有接触过实验,所以虽然是个简单的问题但是不太明白,搜索也不太能找到方向
希望各位版友不吝赐教
谢谢
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  • 附件 1 : 7-A_more_efficient_method_to_generate_integration-free_human_iPS_cells.pdf
  • 2015-10-14 22:46:55, 934.96 K

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