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Michael4ever

新虫 (初入文坛)

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[求助] 关于ppiczαA转化毕赤酵母GS115后表型的鉴定已有2人参与

各位大神，小弟接触毕赤酵母真核表达不久，很多东西不懂，大家都是怎么筛选mut+和muts的，ppiczαA和ppic9k不太一样，没有HIS4，一般不用md和mm筛选，我看文献里面用的是ypds培养基筛选的，我很好奇这样就能筛选出mut+么，还是得用pcr的方法鉴定表型？

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1楼 2015-09-28 14:59:54

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高gaoeryang

银虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

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Michael4ever: 金币+20, ★有帮助 2015-10-21 09:41:10

引用回帖:

6楼: Originally posted by Michael4ever at 2015-10-17 23:20:56
谢谢你，这么长时间终于有人回复了！但是据我所知，这种用抗性筛选出来的不是高拷贝么，跟表型有什么关系…
...

请仔细看酵母手册
Mut+和Muts：在毕赤酵母基因组中有2个醇氧化物酶编码基因，即AOX1基因和AOX2基因。菌株利用甲醇的速度主要是依靠AOX1基因表达的AOX1蛋白，其醇氧化物酶的活性非常高以至于在有AOX1 酶蛋白存在的情况下可以忽略AOX2酶蛋白，这就是甲醇营养型毕赤酵母的两种表型Mut+和Muts产生的原理。当菌株基因组中既有AOX1基因，也有AOX2基因时，菌株的表型为Mut+ 该菌株有甲醇的培养基中仍可以正常生长。当菌株基因组中仅有AOX2 因时，菌株的表型为Muts，该菌株在有甲醇的培养基中生长缓慢。

Mut+ or Muts跟你的酶切线性化方式和酵母菌株类型有关系,以GS115为例：sal1 his+mut+
sac1 his+mut+
bgl2 his+muts
文献当中就这样用zeocin抗性筛选结合他的线性化方式，已经得出了理论上的结果。要是想严谨一些的话，就再做个鉴定。

然后对于你说的：“ppiczαA和ppic9k不太一样，没有HIS4，一般不用md和mm筛选”怎么就不能用md和mm进行筛选？鉴定酵母Mut+ or Muts最普通的方法就用到了这两个培养基，跟载体是什么没关系。