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Michael4ever

新虫 (初入文坛)

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[求助] 关于ppiczαA转化毕赤酵母GS115后表型的鉴定已有2人参与

各位大神，小弟接触毕赤酵母真核表达不久，很多东西不懂，大家都是怎么筛选mut+和muts的，ppiczαA和ppic9k不太一样，没有HIS4，一般不用md和mm筛选，我看文献里面用的是ypds培养基筛选的，我很好奇这样就能筛选出mut+么，还是得用pcr的方法鉴定表型？

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1楼 2015-09-28 14:59:54

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Michael4ever

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引用回帖:

9楼: Originally posted by 高gaoeryang at 2015-10-20 10:48:11
请仔细看酵母手册
Mut+和Muts：在毕赤酵母基因组中有2个醇氧化物酶编码基因，即AOX1基因和AOX2基因。菌株利用甲醇的速度主要是依靠AOX1基因表达的AOX1蛋白，其醇氧化物酶的活性非常高以至于在有AOX1 酶蛋白存在的 ...

谢谢你，你的回答很详细，金币也给你了，但我还是想跟你深入探讨一下，我看的文献中只要是ppiczaA和组氨酸缺陷性菌株(GS115/KM71)配合使用的时候.无一例外都没有用MM和MD筛选过表型，这就引起了我的怀疑，再加上之前有个虫友也说过“组氨酸筛选只适合带有HIS4的表达载体同你的组氨酸缺陷性菌株配套的表达系统。你用的质粒ppiczaA没有HIS4，因此组氨酸筛选不合适，因此只能用抗性筛选。培养基就没必要用MM/MMH或者MD\MDH了，用YPDSZ培养基就可以了”这是不是说明在筛选表型的时候还是得根据你用的是什么质粒？MM和MD筛选我之前也做过，但是跟理论上分析的一样，由于没有组氨酸，菌株生长非常缓慢，而且营养不良，不饱满，根本无法筛选出手册上所说的“在两种培养基上均正常生长的为HIS+Mut+(因为根本没有HIS4基因嘛。。)”我用镜检排除了长的不是毕赤酵母的可能性。不知道在MD和MM的配置过程中加入组氨酸能否正常用于该情况的下的筛选？不过感觉还是YPDSZ筛选来的简单。。

发自小木虫IOS客户端