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andywang6137

木虫 (著名写手)

[求助] 最近TA克隆老是失败,请大家分析一下。已有9人参与

PCR产物,胶回收后TA克隆,板子总长成这样,请高手分析一下原因。taq酶,宝生物的;胶回收试剂盒,全式金的;T载体,用过生工和全式金的。感受态细胞,全式金和自己制备的。之前还做出来了,上学的时候TA克隆也没出过问题,现在涂的板子老是长成下面图片这样。我自己动手做了一次,2个研究生做了一次都是下面的结果(图1:准备回收的目的片段;图2-4,平板菌液,学生发过来的,忘记那一个是水做的对照)。分析不出来原因,请高手分析一下。谢谢!

最近TA克隆老是失败,请大家分析一下。
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最近TA克隆老是失败,请大家分析一下。-1
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最近TA克隆老是失败,请大家分析一下。-2
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最近TA克隆老是失败,请大家分析一下。-3
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王平阳

金虫 (正式写手)

引用回帖:
19楼: Originally posted by andywang6137 at 2015-10-11 22:27:19
你好,这是我重新做实验的结果,重新PCR扩增,胶回收,TA克隆,LB培养基(全部新买的试剂),Amp(用的还是之前买的生工的,新买的氨苄粉末由于超纯水仪器坏了,怕水质太差,没有配)。摇菌复苏1小时,涂板菌液取了 ...

刚刚我们实验室师弟师妹也出现了这种情况,涂得平板一团糊,我检查了一下,原因相当简单,复苏用的培养基污染了,长满了菌还在用,所以出现这种情况的原因很多的,建议你还是先用新的AMP试试,你所说的感受态死细胞,个人觉得可能性不大,既然是死细胞就不会生长,不会生长怎么会糊成一片呢?
没有做不到,只有想不到!
21楼2015-10-12 09:31:45
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chenli1017

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
浓度太高,稀释下,涂皿不均匀

发自小木虫Android客户端
2楼2015-09-25 18:33:37
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songjie851

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
楼上正解,涂板时候少加点菌液,涂均匀点

发自小木虫IOS客户端
3楼2015-09-25 20:00:12
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cosmoslight

金虫 (小有名气)

转化完直接涂板,应该没这么多

发自小木虫Android客户端
4楼2015-09-25 20:08:16
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