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rola234新虫 (小有名气)
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[求助]
最近做噬菌体筛选，可是怎么做噬菌斑都长不出来，求教到底是什么问题。
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| 最近做课题，是一个噬菌体筛选的课题，用M13作为辅助噬菌体，TG1作为宿主菌，第一次用母液噬菌体做得非常成功，挑到了噬菌斑，并且也测了滴度。但自那以后实验就各种做不出来，我自己制备的M13滴度怎么样都测不出来，更要命的是，被我用来作为阳性对照的母液噬菌体的滴度也也不出来了，真是莫名其妙。我是这样做的，头天晚上挑取M9平板上的TG1单菌落试管过夜摇起来，第二天按1:100转接到锥形瓶里，摇到对数期。用含1.5%的琼脂TYE铺下层平板，上层培养基则是含0.7%的2×TY。TG1摇到对数期后，分别取200μl到EP管里，加入10μl的各稀释梯度的噬菌体，37度水浴侵染半小时，然后加入到3ml置于42度水浴的上层培养基中，立即倒上层平板，倒置过夜培养。做了一周，都没做出来，不管是我自己制备的M13，还是母液M13都长不出噬菌斑，平板上还莫名其妙的染菌，有时候还会长出很多单菌落，就是不见噬菌斑，真的不清楚是怎么回事。M13噬菌体是以TG1的性菌毛作为侵染位点，到底怎样的条件会使TG1的性菌毛丢失。我觉得我的制备过程应该没有问题，每次做到最后，加入PEG以后离心都能得到噬菌体的沉淀，但就是不知道为什么滴度总是测不出来，噬菌斑总是长不出来，求教各位大神！ |
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 噬菌体展示 |
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