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puma2003

铁杆木虫 (著名写手)

[交流] sds-page浓缩胶 不能浓缩

SDS-page 浓缩胶压缩不好,以前跑的时候 能成一条细线的,但现在老是粗粗的一条,不知道怎么回事,所有的试剂我都重新配了,不知道还有什么可能产生影响的因素?郁闷啊
我用的是索莱宝的marker 上样5微升,也是不能压成一条细线
这到底是怎么回事呢
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qgaoamtf

至尊木虫 (职业作家)

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):thx
电压、电流是否稳定?
或参考:http://www.helixnet.cn/thread-9330-1-1.html


[ Last edited by qgaoamtf on 2008-8-31 at 21:51 ]
2楼2008-08-31 20:55:51
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qfzhang

银虫 (小有名气)


xyklmu(金币+1,VIP+0):感谢答复
1 溴酚蓝太多了
2 用异丙醇压胶,试试
3楼2008-09-01 10:35:53
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zyk_527

银虫 (小有名气)


xyklmu(金币+1,VIP+0):感谢答复
丙烯酰胺粉末换新的,绝对可以
4楼2008-09-01 21:41:28
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jasminesj

铜虫 (小有名气)

浓缩胶的pH调整一下试试
5楼2008-09-02 09:36:13
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zwlcxx

银虫 (小有名气)

你看看是不是电泳槽不密封,或者缓冲液的ph有没有改变,或者再加养之前处理时有差错?
6楼2008-09-02 14:40:38
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puma2003

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by zyk_527 at 2008-9-1 21:41:
丙烯酰胺粉末换新的,绝对可以

换用过别人的储液,都没有用
7楼2008-09-02 16:56:59
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blizzard1506

1单双体不是同一公司的,
2换个上样缓冲液试试。
8楼2008-09-07 17:32:40
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hzxizh

铁杆木虫 (正式写手)

经验:重新配置AP!!
9楼2008-09-07 20:19:33
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panfanbin

金虫 (初入文坛)

★ ★
司马诸葛(金币+2,VIP+0):谢谢交流 7-13 05:44
在SDS-PAGE不连续电泳中,制胶缓冲液使用的是Tris-HCL缓冲系统,浓缩胶是pH6.7,分离胶pH8.9;而电泳缓冲液使用的Tris-甘氨酸缓冲系统。在浓缩胶中,其pH环境呈弱酸性,因此甘氨酸解离很少,其在电场的作用下,泳动效率低;而CL离子却很高,两者之间形成导电性较低的区带,蛋白分子就介于二者之间泳动。由于导电性与电场强度成反比,这一区带便形成了较高的电压剃度,压着蛋白质分子聚集到一起,浓缩为一狭窄的区带。当样品进入分离胶后,由于胶中pH的增加,呈碱性,甘氨酸大量解离,泳动速率增加,直接紧随氯离子之后,同时由于分离胶孔径的缩小,在电场的作用下,蛋白分子根据其固有的带电性和分子大小进行分离。
  所以,pH对整个反应体系的影响是至关重要的,实验中在排除其他因素之后仍不能很好解决问题的情况,应首要考虑该因素。
10楼2008-09-08 12:49:16
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