| 查看: 1917 | 回复: 10 | |||
kangaroo0513新虫 (正式写手)
|
[求助]
超级短片段如何PCR或者其他方式引入载体？以及Cre/LoxP问题。。
|
|
1、目的片段66bp左右，两边打算加几个酶切位点，加好大约100bp，这个长度好尴尬。。怎么处理比较好？ 最终打算做成这个样子（如图） http://muchongimg.xmcimg.com/data/b ... _1442904607_413.png 其中，黄色对应某模板，蓝色的是我打算在引物两边加的酶切位点。。这个PCR回收效率似乎超级低是吧。。 2、Cre/LoxP系统中的loxP核心序列8bp可以是任意序列么？我知道两个loxP的核心序列要相同或者相反方向，只是这8bp是不是可以任意设计的？ （因为看到百度里这么说的：Cre不仅可以识别LoxP的2个13bp的反向重复序列和8bp的间隔区域，而且当一个13bp的反向重复序列或者8bp的间隔区发生改变时仍能识别并发生重组。利用这一特点，人们在构建载体时可以根据需要改造LoxP位点序列，以用于特定的基因突变或修复，增加了该系统的应用范围。） 3、据说Cre/loxP是可逆过程，那么，两个同向loxP之间的基因敲除的彻底么？两个反向LoxP之间的基因是不是可能被倒装后又正过来了？  xxxx.png |
回复此楼» 猜你喜欢
含氟糖皮质激素的外用抗炎利器醋酸氟轻松
已经有0人回复
-
阿莫奈韦（Amenamevir）：解旋酶-引物酶靶向分子的结构特征与合成路径全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有232人回复
-
利瑞鲁单抗：靶向KIR的NK细胞检查点工具抗体，结构基础与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
高gaoeryang
银虫 (小有名气)
- 应助: 18 (小学生)
- 金币: 324.2
- 散金: 300
- 红花: 3
- 帖子: 116
- 在线: 262.5小时
- 虫号: 2042656
- 注册: 2012-10-04
- 性别: MM
- 专业: 生物化学
2楼2015-09-23 14:20:37
kangaroo0513
新虫 (正式写手)
- MolEPI: 1
- 应助: 154 (高中生)
- 金币: 2277.4
- 散金: 100
- 红花: 29
- 帖子: 464
- 在线: 119.4小时
- 虫号: 2621902
- 注册: 2013-08-28
- 专业: 细胞物质运输
3楼2015-09-23 14:49:32
高gaoeryang
银虫 (小有名气)
- 应助: 18 (小学生)
- 金币: 324.2
- 散金: 300
- 红花: 3
- 帖子: 116
- 在线: 262.5小时
- 虫号: 2042656
- 注册: 2012-10-04
- 性别: MM
- 专业: 生物化学
4楼2015-09-24 16:25:55
kangaroo0513
新虫 (正式写手)
- MolEPI: 1
- 应助: 154 (高中生)
- 金币: 2277.4
- 散金: 100
- 红花: 29
- 帖子: 464
- 在线: 119.4小时
- 虫号: 2621902
- 注册: 2013-08-28
- 专业: 细胞物质运输
5楼2015-09-25 12:46:06
DanceMacabre
新虫 (小有名气)
- 应助: 5 (幼儿园)
- 金币: 17.1
- 帖子: 152
- 在线: 25.6小时
- 虫号: 3295919
- 注册: 2014-06-27
- 性别: GG
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
【答案】应助回帖
★
感谢参与，应助指数 +1
kangaroo0513: 金币+1, ★有帮助, 神马叫100p？难道是pmol？以前做过crispr的退火后连接没成功。。555 2015-09-25 20:26:20
感谢参与，应助指数 +1
kangaroo0513: 金币+1, ★有帮助, 神马叫100p？难道是pmol？以前做过crispr的退火后连接没成功。。555 2015-09-25 20:26:20
|
把序列加上酶切位点之后，直接合成。将正反向引物稀释成100P的浓度，各5ul，加水至15ul体系，沸水浴5min，至自然冷却。将载体双酶切，曝露出酶切位点，将退火引物与载体用连接酶连接即可 发自小木虫Android客户端 |
6楼2015-09-25 13:04:11
DanceMacabre
新虫 (小有名气)
- 应助: 5 (幼儿园)
- 金币: 17.1
- 帖子: 152
- 在线: 25.6小时
- 虫号: 3295919
- 注册: 2014-06-27
- 性别: GG
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
7楼2015-09-25 13:26:38
8楼2015-09-25 14:22:04
高gaoeryang
银虫 (小有名气)
- 应助: 18 (小学生)
- 金币: 324.2
- 散金: 300
- 红花: 3
- 帖子: 116
- 在线: 262.5小时
- 虫号: 2042656
- 注册: 2012-10-04
- 性别: MM
- 专业: 生物化学
9楼2015-09-25 15:42:43
10楼2017-02-15 16:15:21
