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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 综合其他 » 求恶臭假单胞菌电转感受态的制备条件
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踏雪无痕love

金虫 (正式写手)

[求助] 求恶臭假单胞菌电转感受态的制备条件 已有4人参与

如题，先最近在做恶臭假单胞菌的电转感受态，可是做了几次感受态的效果不是很好，求有没有做过这个菌的感受态的童鞋们，求指导啊，一起交流交流也好。。。。
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1楼 2015-09-18 00:42:39
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biosci

捐助贵宾 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这个菌好像有专门的载体。你的载体用的哪个？是能转化进去额
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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

踏雪无痕love
2楼2015-09-19 08:57:58
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踏雪无痕love

金虫 (正式写手)
我用的是pk18mobsacB这个载体，想先用这个载体来验证恶臭假单孢菌的感受态制备效果，然后用Tn5转座子转入进入，做这个菌的插入突变体，进行建库

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3楼2015-09-20 17:46:19
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踏雪无痕love

金虫 (正式写手)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by biosci at 2015-09-19 08:57:58
这个菌好像有专门的载体。你的载体用的哪个？是能转化进去额

感谢你的回复。希望可以继续探讨

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4楼2015-09-20 17:47:33
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梦黎科研

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

请问你们那里用这个菌做什么实验呢？我们这里做病理，但发现与文献报道不一致……

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5楼2015-09-21 08:01:48
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踏雪无痕love

金虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 梦黎科研 at 2015-09-21 08:01:48
请问你们那里用这个菌做什么实验呢？我们这里做病理，但发现与文献报道不一致……

我们做的是生物质转化方面的

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6楼2015-09-21 12:07:13
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李万一

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

你现在感受态做好了吗，能转进去吗？试试100mmolcacl2，42热激，30复苏1.5小时，或换个质粒试试
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7楼2015-12-24 17:42:02
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踏雪无痕love

金虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 李万一 at 2015-12-24 17:42:02
你现在感受态做好了吗，能转进去吗？试试100mmolcacl2，42热激，30复苏1.5小时，或换个质粒试试

因为电转一直转不进去，所以采用了三亲接合的方法转进去了
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8楼2015-12-26 00:52:45
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zc十分钟

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我就是做这个菌，我也用过你这个质粒，因为你用的这个质粒是基因敲除质粒，是整合型的，也就是你用kana去筛选的时候，只能是已经有了第一次重组交换，kana平板上才会有菌落。电转没毛病，效率也挺高，因为我用过另一个游离型的，不错的。只是这个自杀质粒的确做基因敲除很麻烦，效率不是一般的低，我同事平行做crispr和这个pk18，后来是crispr敲除掉的。加油！
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lifeistooshorttobelittle.
9楼2017-03-14 04:53:58
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