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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » BamH1和Kpn1 双酶切
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F_Bissextile

新虫 (初入文坛)

[求助] BamH1和Kpn1 双酶切 已有7人参与

TaKaRa公司的BamH1和Kpn1，反应体系不同，反应温度也不同。请问怎样建立双酶切体系？
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1楼 2015-09-18 00:28:34
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

u9300108

金虫 (小有名气)

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2楼2015-09-18 09:15:38
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小人物12356

新虫 (初入文坛)
Kpn1用的20ul的体系，加1ul酶，10—15ul的DNA（根据你所提取的DNA浓度）如果加量少的话跑胶的时候会看不清条带，buffer根据所给的体系加，然后用无菌水补齐。

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4楼2015-09-18 10:48:47
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老朱Supreme

金虫 (初入文坛)

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感谢参与，应助指数 +1
可以选择双步酶切法吧，虽然回收效率会降低但是这个方法是比较经典的。
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5楼2015-09-18 10:56:15
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xujian568

至尊木虫 (著名写手)

Count XU

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0.5×K buffer，请参考takara的双切表
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活着就要让人感受到你的存在。
8楼2015-09-18 16:27:15
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yangtzelv

新虫 (小有名气)

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参考双酶切的表格，按照takanra的操作说明即可。05xK
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9楼2015-09-19 17:33:39
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liping121200

铜虫 (小有名气)

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我们实验室都用的Takara家的酶进行酶切，都用的37度，一般20uL体系各加上1uL酶就足够了，效果都还不错，如果想反应体系严谨一点，可以根据他们公司提供的说明书加。
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好好学习，天天向上
3楼2015-09-18 09:20:37
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mr.clutch

新虫 (小有名气)

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用一种酶单酶切后用醋酸钠乙醇沉淀，然后再用另一种酶酶切

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6楼2015-09-18 11:47:09
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南京李博士

金虫 (小有名气)

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我们takanra   30度  酶切过夜   棒棒的！

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7楼2015-09-18 11:56:12
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大小白白

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by mr.clutch at 2015-09-18 11:47:09
用一种酶单酶切后用醋酸钠乙醇沉淀，然后再用另一种酶酶切

请问具体步骤是怎样的呢？

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10楼2015-09-19 17:36:27
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