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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 请问一下我的聚丙烯酰胺胶跑成这个样子，到底是什么原因？
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杨晓君颖

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 阿维victor at 2015-09-18 23:55:04
你样应该不大好吧，pcr跑出来直接点掉的还是藏两天点的？
...

有时候时间来得及就当天点，来不及就隔天点
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11楼2015-09-19 11:10:07
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杨晓君颖

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by schkk at 2015-09-19 10:14:48
PCR多少循环？好像是循环多了

我设计的是35个循环，94度5分钟，（35个循环）94度30S，退火温度45S，72度2分，最后72度10分。
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12楼2015-09-19 11:12:35
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杨晓君颖

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by zhoumin-09 at 2015-09-19 10:45:42
也就是样品缓冲液的性质，特别是PH的影响，还是挺大的...

一直用的是EB洗脱液，用试剂盒提的DNA
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13楼2015-09-19 11:13:45
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schkk

至尊木虫 (正式写手)
dNTPs终浓度多大？

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14楼2015-09-19 15:50:51
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杨晓君颖

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
14楼: Originally posted by schkk at 2015-09-19 15:50:51
dNTPs终浓度多大？

我用的是Mix，不知道终浓度啊
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15楼2015-09-19 17:16:29
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大小白白

新虫 (初入文坛)
可能是退火温度太低，错配率太高，适当提高退火温度条带就少了，你可以试试不同退火温度，做几个阶梯温度对比下

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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

杨晓君颖
16楼2015-09-19 17:43:10
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杨晓君颖

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
16楼: Originally posted by 大小白白 at 2015-09-19 17:43:10
可能是退火温度太低，错配率太高，适当提高退火温度条带就少了，你可以试试不同退火温度，做几个阶梯温度对比下

好的，谢谢
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17楼2015-09-19 20:46:49
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lini-828127

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你这是跑的核酸吧?条带太乱了，PCR的问题，和石蜡油没关系
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18楼2015-09-20 00:17:02
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MAS_rice

至尊木虫 (著名写手)
你看看你的mix 是聚丙烯酰胺的还是琼脂糖的，我之前用琼脂糖的跑聚丙烯酰胺跑出来就是你这个样子的

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竹杖芒鞋轻胜马，谁怕，一蓑烟雨任平生；回首向来萧瑟处，归去，也无风雨也无晴
19楼2015-09-20 12:39:03
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xiaoyanzi517

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

显色过了，减少显色时间试试
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偶时晴天偶时雨
20楼2015-09-20 21:32:05
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