应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 提土壤总DNA 的问题，郁闷了。。。
71/1返回列表
查看: 1449  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

crjtina

银虫 (小有名气)

[求助] 提土壤总DNA 的问题，郁闷了。。。 已有2人参与

之前用的国产的试剂盒提总DNA，浓度和纯度都不高，后来PCR后有条带，只不过二聚体有点严重，想着换成进口的试剂盒用的是MP Fast的提土壤总DNA，结果没P出来条带，好郁闷，Marker跑的也不是很好，试剂盒里的BBS溶液好像比我用的Loading buffer效果要好，现在是自己摸索的各种阶段，郁闷啊。。。。。。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
赠人玫瑰，手有余香。
1楼 2015-09-17 17:13:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

爱睡猪

金虫 (正式写手)
前处理清洗和除大颗粒要做好，我们用CTAB和试剂盒方法都提过，还可以
赞一下 回复此楼
ControlMyself
2楼2015-09-18 08:46:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

crjtina

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 爱睡猪 at 2015-09-18 08:46:54
前处理清洗和除大颗粒要做好，我们用CTAB和试剂盒方法都提过，还可以

提的是新鲜的泥状，如何前处理啊，主要想保留其微生物菌类的多样性，没做前处理
赞一下 回复此楼
赠人玫瑰，手有余香。
3楼2015-09-18 09:02:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

酒家何处

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
crjtina: 金币+2, ★★★很有帮助 2015-09-18 13:59:00
把土用pbs或者超纯水震荡。或者家玻璃珠震荡。多震荡一会。然后低速离心。取上清。微生物都在水里。下面的东西就都扔了。怕有丢的，再洗涤两次。合并上清。然后上清高速离心上清。时间可以长一些。弃上清，留沉淀。然后再用试剂盒处理这个沉淀。低速1000以下。高速10000以上

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2015-09-18 09:14:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

酒家何处

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by 酒家何处 at 2015-09-18 09:14:53
把土用pbs或者超纯水震荡。或者家玻璃珠震荡。多震荡一会。然后低速离心。取上清。微生物都在水里。下面的东西就都扔了。怕有丢的，再洗涤两次。合并上清。然后上清高速离心上清。时间可以长一些。弃上清，留沉淀。 ...

低速还是更低点吧 。能把土沉下去就好了

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
5楼2015-09-18 09:18:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

crjtina

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 酒家何处 at 2015-09-18 09:14:53
把土用pbs或者超纯水震荡。或者家玻璃珠震荡。多震荡一会。然后低速离心。取上清。微生物都在水里。下面的东西就都扔了。怕有丢的，再洗涤两次。合并上清。然后上清高速离心上清。时间可以长一些。弃上清，留沉淀。 ...

嗯，嗯，回头我试试，但我觉得PCR也是有问题的，我参考了之前的文献，反应条件没变，反应体系调整到25 ul，10*taq buffer:2.5ul,dDNT:0.5;Mgcl2:2.5,引物各1.5，模板2 ul,Taq酶:0.5
反应条件：94预变性5min，94:1min,55°退火，72°延伸，38循环，72°延伸2min
赞一下 回复此楼
赠人玫瑰，手有余香。
6楼2015-09-18 13:58:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

爱睡猪

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
5楼: Originally posted by 酒家何处 at 2015-09-18 09:18:58
低速还是更低点吧 。能把土沉下去就好了
...

丢失的部分就让他丢掉吧，影响你提取的质量比你丢掉的那部分的影响还要大，做菌群分析PCR循环建议不要超过28，一般22-25就行了，循环越大越不准
赞一下 回复此楼
ControlMyself
7楼2015-09-19 12:17:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 crjtina 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高，自己申请怎么就这么难 +13 Kittylucky 2026-08-27 14/700 2026-09-01 11:06 by feng6531
[论文投稿] 小白求助 投论文要求的highlights应该如何写 5+3 l1963982152 2026-08-29 4/200 2026-09-01 09:04 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的？ +17 爱看书的可乐 2026-08-26 19/950 2026-08-31 21:30 by xiangy672
[基金申请] 哪位高人中了，把查询到的截图贴出来让我看看，让我长长见识 +6 yuleib84 2026-08-26 7/350 2026-08-31 19:46 by 鱼翔浅底1
[基金申请] 面上意见出来了 +12 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 23/1150 2026-08-31 18:57 by 黄鸟于飞Chao
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗？ +7 349506619 2026-08-28 7/350 2026-08-31 13:39 by 冼亮淀粉酶
[基金申请] 29号明天会评吗 +4 笨笨唐 2026-08-28 4/200 2026-08-31 09:30 by huixian257
[基金申请] 基金不中，共勉 +12 eulota 2026-08-26 12/600 2026-08-31 08:42 by ZJTJZ
[基金申请] 为什么到现在没收到通知？ +5 tannykie 2026-08-29 5/250 2026-08-30 21:05 by purplejack
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +7 德尚中行 2026-08-27 8/400 2026-08-30 20:52 by purplejack
[考博] 找导师 +6 yuanjiabao 2026-08-29 7/350 2026-08-30 14:40 by 生科新手
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+15) +15 晴天加油 2026-08-26 16/800 2026-08-29 18:28 by symmetry
[基金申请] 系统查不到 +11 董八千 2026-08-26 11/550 2026-08-28 18:06 by Leogzhya
[基金申请] 怎么查啊 +6 huang1991js 2026-08-26 6/300 2026-08-28 08:42 by winsaint
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜？ 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 我不理解！ +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
[基金申请] 牛来！米来！面来！ +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭