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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR的目的片段是2200bp左右，但是扩增不出来
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liuxinyueer

木虫 (正式写手)

[交流] PCR的目的片段是2200bp左右，但是扩增不出来 已有6人参与

PCR的目的片段是2200bp左右，但是扩增不出来，出来的条带在600bp左右，我用的酶是transstart KD plus dna polymerase，模板是逆转录后的cDNA
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1楼 2015-09-13 15:28:16
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liutong1026

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
实验每一步都需要验证的，不要等最后了出不了结果在去找愿因。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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4楼2015-09-14 13:23:38
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naringenin

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
光pcr出不来的可能性就有很多，何况是反转录pcr，你提供的信息不足以判断任何事情。
anyway，根据我多年反转录pcr的经验，
大部分反转录pcr做不出来的原因在于RNA质量差。
当然还有很多其他可能的原因。
只能祝你实验顺利了。
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2楼2015-09-13 16:01:12
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neon_alone

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
如果模板是CDNA的话，模板质量好坏很重要，还有就是引物设计很重要。PCR扩不出来原因太多了，只能逐渐摸索，你说的太过广泛，不好分析。你首先要确定你的CDNA 260/280在1.8-2才比较好，而且比较新不会降解的问题。而且比如50ul体系中，模板就100-300ng比较好，多了也不行。引物特别特别重要，退火我一般从53-58设置梯度除非比较特殊的情况。另外我推荐一个全式金的酶，fastPFUfly，加入硫酸镁的，你可以试试。适用于复杂的模板
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3楼2015-09-13 16:38:04
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biotech_zhou

木虫 (著名写手)

待人以诚：专业/专注/专心
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
高品质2×逆转录MIX，操作方便简单，RT反应只需加入模板和水，免费试用申请进行中，有意请PM哦······
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5楼2016-04-25 17:16:35
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