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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » 求助 为什么跑WB 我的总AMPK一直不一样
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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wpf520

金虫 (正式写手)

[求助] 求助 为什么跑WB 我的总AMPK一直不一样 已有1人参与

6孔板细胞数差不多，经过蛋白定量，为何总AMPK一直跑不齐？求大神解答
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No.pain,No.gain!
1楼 2015-08-31 08:14:50
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爱拼小侠女

新虫 (初入文坛)
你好，看到你也做AMPK的WB实验，很想咨询，跑SDS-PAGE时候最好配制多大浓度的胶，谢谢
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永远有梦想永远勇敢追
6楼2015-10-26 11:05:18
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evangelina

无虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
如果不觉得麻烦，你根据跑出来的结果微调蛋白量，重新再跑一次胶不就好了

如果样本有限，那你就应该改良蛋白定量的方法，例如换成 Bradford Lowry 之类的就比280要准确
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2楼2015-08-31 10:39:10
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wpf520

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by evangelina at 2015-08-31 10:39:10
如果不觉得麻烦，你根据跑出来的结果微调蛋白量，重新再跑一次胶不就好了

如果样本有限，那你就应该改良蛋白定量的方法，例如换成 Bradford Lowry 之类的就比280要准确

actin很齐，怎么回事？😊

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No.pain,No.gain!
3楼2015-08-31 11:08:05
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evangelina

无虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
wpf520: 金币+25, ★有帮助 2015-08-31 14:04:06
那你的总AMPK是不是做过磷酸化AMPK后做的，会不会是膜没有洗干净，还有磷酸化的信号残留在上面？

假如都不是，说不定总AMPK的量就真是不一样，也算一种发现
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4楼2015-08-31 11:53:37
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